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小丁山

铜虫 (小有名气)

[交流] 鉴定阳性克隆 已有5人参与

pcr做阳性克隆的鉴定，发现p出来的条带比目的条带要大很多，目的条带1k，p出来条带有1.8k，求原因
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1楼 2011-06-20 13:34:50
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
那肯定不对了，非特异性扩增。
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2楼2011-06-20 13:46:04
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小丁山

铜虫 (小有名气)
之前我双酶切已经鉴定过 测序也鉴定过 片段是没有问题的
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3楼2011-06-20 14:07:37
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475502411

铜虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你检查一下看质粒上是不是也有跟你引物接合的位置，祝你好运！
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
4楼2011-06-20 14:08:13
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小丁山

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-06-20 14:08:13:
你检查一下看质粒上是不是也有跟你引物接合的位置，祝你好运！

是通用测序引物p的 应该能结合
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5楼2011-06-20 14:25:02
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+4, EPI+1): Good! 2011-06-20 16:21:37
1：很有可能是非特异性条带，要么就是菌不纯导致的
2：如果你想继续往下做，那么去提取菌的质粒，首先看看能不能提取出来，提出来之后做一个酶切看看，看看跟你当初酶切的质粒和基因大小一致不？根据我的经验，应该不对，所以最好再重新连接转化吧。。。
3：重新进行连接转化，连接体系可以稍微变一下。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-06-20 15:20:04
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混在冷泉港

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 是个办法 2011-06-27 16:57:51
把质粒提取出来，测序
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7楼2011-06-26 00:08:18
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jiying198509

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
应该不对 建议重新PCR 重新纯化 连接
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8楼2011-12-02 15:10:49
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