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zqt123_1981

木虫 (小有名气)

[交流] 阳性克隆的鉴定问题 已有6人参与

各位如图1蓝白斑筛选白斑菌落PCR很正确,然后摇菌提取质粒,图2前10个孔质粒PCR,后十个孔质粒酶切。图三 前十个孔质粒酶切后十个孔是质粒
为啥PCR有目的条带,酶切却没有啊






[ Last edited by zqt123_1981 on 2011-6-2 at 19:45 ]
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhd997(金币+3): good 2011-06-02 09:05:49
引用回帖:
Originally posted by zqt123_1981 at 2011-06-01 21:20:19:
各位我有一段未知片段要去测序,在蓝白斑筛选的时候白斑用菌落PCR鉴定结果正确,然后挑菌进行摇菌培养,我看有的说菌液也可以PCR,菌液提取质粒也可以PCR,还有就是质粒酶切。这三个哪个更准确一点,如果酶切的 ...

PCR的话,用菌落、菌液或者质粒来做都可以,但是用菌落和菌液来鉴定是最快速的方法,一般如果pcr的方法鉴定不出来的话就采用酶切来验证,酶切位点的选择只要在克隆位点的的上下游随便选两个就可以了,当然考虑到成本,越常用的酶越好。
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-06-01 22:12:42
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