应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做克隆出了很诡异的问题
151/2返回列表12下一页
查看: 1758  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

mengxibio

新虫 (小有名气)

[交流] 做克隆出了很诡异的问题 已有9人参与

在做克隆，向感受态细胞导入载体出问题了。
向感受态细胞导入载体（上有抗amp位点，以及蓝白斑的位点）
结果，negative（纯的感受态细胞，没有导入载体）上出现大量蓝斑，而且其他几板普遍出现大量蓝斑，白斑几乎没有
之后我做菌落pcr，证明包括negative和其他几板上的蓝斑菌的确没有导入载体

问题是什么，操作上绝没有问题，我和另外一个人先后做了两遍，同样的结果

现在就怀疑是感受态细胞的问题，是一个师兄自己做的。但是这样的感受态细胞也太可怕了吧，不包括载体（已经用引物，做pcr证明），但是却含有抗amp基因，含有蓝白斑所需的基因

大家认为什么原因呢，排除操作上的原因
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-08-09 11:22:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
从其他公司买几支感受态试试
赞一下(1人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-08-09 12:26:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mengxibio

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2011-08-09 12:26:33:
从其他公司买几支感受态试试

已经订了生工的成品，然后做下看看，估计就是感受态的问题
赞一下 回复此楼
3楼2011-08-09 12:57:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzqno

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): 有可能 2011-08-10 17:58:38
是不是板子的amp失效了，再说了可以自己做感受态细菌啊，没啥难度啊
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-08-09 13:49:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anlewo7777

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone(金币+3): 有见地 2011-08-09 16:58:13
感受态细菌菌株应该是半乳糖苷酶缺陷型菌株，因为导入的质粒引入了菌体缺失的一条半乳糖苷酶肽段，和菌株有的一个肽段互补而有半乳糖苷酶活性，从而降解X-gal产生蓝色。你要是想查原因，可以看你的感受态菌株的说明，看是不是半乳糖苷酶缺陷型
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-08-09 14:06:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mengxibio

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wzqno at 2011-08-09 13:49:47:
是不是板子的amp失效了，再说了可以自己做感受态细菌啊，没啥难度啊

没有失效，这个肯定的。最近时间紧迫，想尽快结束实验
赞一下 回复此楼
6楼2011-08-09 16:38:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mengxibio

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by anlewo7777 at 2011-08-09 14:06:41:
感受态细菌菌株应该是半乳糖苷酶缺陷型菌株，因为导入的质粒引入了菌体缺失的一条半乳糖苷酶肽段，和菌株有的一个肽段互补而有半乳糖苷酶活性，从而降解X-gal产生蓝色。你要是想查原因，可以看你的感受态菌株的说 ...

蓝白斑原理我懂的。用的感受态是一个师兄自己做的。我们实验室是这样，做感受态时做一大批，实验室共用
赞一下 回复此楼
7楼2011-08-09 16:40:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huguangdong

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
阴性变蓝的确说不过去，怎么感受态里面难道本来就有自连的T载体？很诡异，既然你操作没问题只能换感受态了。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-08-09 17:07:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzqno

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by mengxibio at 2011-08-09 16:38:26:
没有失效，这个肯定的。最近时间紧迫，想尽快结束实验

你们实验室有没有DH5a大肠杆菌或者top10啊？？还是自己做感受态吧，转化效率也可以很高的
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-08-09 17:32:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiwei888

禁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
10楼2011-08-09 17:57:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 mengxibio 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +4 守候夕阳CF 2026-03-18 4/200 2026-03-18 22:16 by li123456789.
[考研] 330求调剂 +3 小材化本科 2026-03-18 3/150 2026-03-18 21:55 by 无懈可击111
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-16 10/500 2026-03-18 20:41 by Wangjingyue
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +7 步川酷紫123 2026-03-13 7/350 2026-03-18 17:12 by 尽舜尧1
[考研] 286求调剂 +6 lemonzzn 2026-03-16 9/450 2026-03-18 15:31 by vgtyfty
[考研] 化学工程321分求调剂 +15 大米饭！ 2026-03-15 18/900 2026-03-18 14:52 by haxia
[考研] 材料与化工一志愿南昌大学327求调剂推荐 +8 Ncdx123456 2026-03-13 9/450 2026-03-18 14:40 by haxia
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +6 困于星晨 2026-03-17 6/300 2026-03-18 10:21 by kkcoco25
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[基金申请] 国自科面上基金字体 +6 iwuli 2026-03-12 7/350 2026-03-16 21:18 by sculhf
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭