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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化克隆的问题
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huajin2628

金虫 (正式写手)

[求助] 转化克隆的问题

构建质粒，连接转化老是不成功，大致情况如下：     载体pCS2，插入片段约800bp，酶切位点BamH1、Cla1，全式金T4 DNA Ligase，粘性末端连接！

     载体和插入片段都是从原载体双酶切切下的，应该没有问题，本人怀疑是连接时出了问题，
     请各位大侠给分析一下可能是那一步出的问题，给点建设性意见，小弟拜谢了……
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寓念于风
1楼 2011-11-18 13:07:56
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da_da

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1楼: Originally posted by huajin2628 at 2011-11-18 13:07:56:
构建质粒，连接转化老是不成功，大致情况如下：     载体pCS2，插入片段约800bp，酶切位点BamH1、Cla1，全式金T4 DNA Ligase，粘性末端连接！

     载体和插入片段都是从原载体双酶切切下的，应该没有问题，本 ...

说具体点，大家才好给你帮助啊
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心有多大，江湖就有多大！
2楼2011-11-18 14:02:52
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liuxing5157

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

连接是目的基因，载体的浓度？连接体系？转化后的结果？
说说，我们才可能帮上忙。
赞一下 回复此楼
3楼2011-11-18 22:20:22
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

huajin2628: 回帖置顶 2012-11-26 14:04:24
希望这两个帖子对你有帮助
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2311683
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3069329
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-11-18 22:27:17
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huajin2628

金虫 (正式写手)
引用回帖:
62462楼: Originally posted by huajin2628 at 2011-11-18 13:07:56
构建质粒，连接转化老是不成功，大致情况如下：     载体pCS2，插入片段约800bp，酶切位点BamH1、Cla1，全式金T4 DNA Ligase，粘性末端连接！

     载体和插入片段都是从原载体双酶切切下的，应该没有问题，本人 ...

5楼2012-11-30 10:14:51
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aoda123

木虫 (正式写手)
请教楼主，从你选的两个酶切位点上切下的片段是多大？
               还有就是，pCS2空载体表达蛋白激发光是红色码？
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身体健康，工作顺利
6楼2013-04-25 16:18:52
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