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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于Kan板克隆的问题
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pengpeng7196

银虫 (小有名气)

[求助] 关于Kan板克隆的问题

最近做的连接转化，Kan板上长了百来个克隆，做菌落PCR鉴定阳性比率时发现P出了很多条带，大小皆有，所以改为挑单克隆到LB管抽质粒，但是至今挑了N管到Kan管中，没有一个长了的，于是挑到没有Kan的管子里，10管就长了一管，这一管经过抽质粒，酶切后验证是阳性克隆，但是我想知道阳性克隆的比率，不明白为什么在Kan板上能长的菌落不能在LB里生长。请大家指教，谢谢！
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不断丰富自己
1楼 2011-10-14 16:12:16
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peace12039088

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是不是前后用的Kan浓度不一致，或是你的Kan不新鲜，菌落活性不好？
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2楼2011-10-14 16:41:49
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peace12039088

银虫 (小有名气)
Kan板不新鲜，放久了。我遇到过类似的情况，重新倒平板会好很多。
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3楼2011-10-14 16:43:51
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pengpeng7196

银虫 (小有名气)
主要问题是挑到不加Kan的LB管也不长，就算Kan失效了也应该长啊
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不断丰富自己
4楼2011-10-14 16:49:01
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peace12039088

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-10-14 17:40:54
引用回帖:
4楼: Originally posted by pengpeng7196 at 2011-10-14 16:49:01:
主要问题是挑到不加Kan的LB管也不长，就算Kan失效了也应该长啊

那可能就是菌活性的问题了，你可以试试重新涂菌液至新鲜Kan板上
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5楼2011-10-14 17:34:27
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pengpeng7196

银虫 (小有名气)
我又开始重新做了一次，先看看这次结果，然后再和大家讨论哈
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不断丰富自己
6楼2011-10-14 17:53:31
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