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pengpeng7196

银虫 (小有名气)

[求助] 关于Kan板克隆的问题

最近做的连接转化,Kan板上长了百来个克隆,做菌落PCR鉴定阳性比率时发现P出了很多条带,大小皆有,所以改为挑单克隆到LB管抽质粒,但是至今挑了N管到Kan管中,没有一个长了的,于是挑到没有Kan的管子里,10管就长了一管,这一管经过抽质粒,酶切后验证是阳性克隆,但是我想知道阳性克隆的比率,不明白为什么在Kan板上能长的菌落不能在LB里生长。请大家指教,谢谢!
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不断丰富自己
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pengpeng7196

银虫 (小有名气)

主要问题是挑到不加Kan的LB管也不长,就算Kan失效了也应该长啊
不断丰富自己
4楼2011-10-14 16:49:01
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peace12039088

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是不是前后用的Kan浓度不一致,或是你的Kan不新鲜,菌落活性不好?
2楼2011-10-14 16:41:49
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peace12039088

银虫 (小有名气)

Kan板不新鲜,放久了。我遇到过类似的情况,重新倒平板会好很多。
3楼2011-10-14 16:43:51
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peace12039088

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助! 2011-10-14 17:40:54
引用回帖:
4楼: Originally posted by pengpeng7196 at 2011-10-14 16:49:01:
主要问题是挑到不加Kan的LB管也不长,就算Kan失效了也应该长啊

那可能就是菌活性的问题了,你可以试试重新涂菌液至新鲜Kan板上
5楼2011-10-14 17:34:27
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