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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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西瓜: 金币+2, 听起来好难…… 2012-03-18 17:50:09
酶切专家: 回帖置顶 2012-03-19 20:47:18
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 根据楼主反馈,切实可行,授予EPI! 2012-03-20 11:44:26
我以前做过类似的部分酶切实验:
我得经验如下:
首先必须精确计算所需的酶量。我曾经在小木虫推荐过一个软件(Double digestion designer),你可以利用该软件精确计算出EcoRI的用量,然后将其理论用量减少1/2或2/3,将酶切时间缩短到5分钟,应该没问题。。(注意,酶一定先稀释10倍以上,然后从稀释的酶样品中取出所需的酶量,否则,由于原酶中含50%甘油,误差太大,肯定效果不好)。
如果这种克隆都能成功,你可以藐视大部分的分子克隆工作。
祝一切顺利。
10楼2012-03-18 15:23:09
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