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酶切专家

金虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by panda73 at 2012-03-18 15:23:09:
我以前做过类似的部分酶切实验:
我得经验如下:
首先必须精确计算所需的酶量。我曾经在小木虫推荐过一个软件(Double digestion designer),你可以利用该软件精确计算出EcoRI的 ...

我这试试。
11楼2012-03-18 15:25:14
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 0624410024 at 2012-03-18 10:16:30:
我是你的话不用多想就换酶切位点!~

个人表示完全同意!
再不行的话就分步克隆!
12楼2012-03-18 17:50:46
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酶切专家

金虫 (小有名气)


酶切专家: 回帖置顶 2012-03-19 21:11:56
西瓜: 金币+1, 恭喜恭喜~期待楼主结果哈~ 2012-03-20 11:42:50
引用回帖:
10楼: Originally posted by panda73 at 2012-03-18 15:23:09:
我以前做过类似的部分酶切实验:
我得经验如下:
首先必须精确计算所需的酶量。我曾经在小木虫推荐过一个软件(Double digestion designer),你可以利用该软件精确计算出EcoRI的 ...

我按照此建议,利用double digestion designer计算的酶量的1/2,切了5分钟,然后加SDS终止反应,电泳检测,发现的确是部分酶切,已经成功回收到预期的目的条带。
非常感谢!
随后会汇报克隆结果。
如果成功,就节省了我好几天时间。
13楼2012-03-19 20:51:42
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酶切专家

金虫 (小有名气)

酶切专家: 回帖置顶 2012-03-22 20:40:00
已经得到阳性克隆送测序,应该没问题,哈哈!爽!!!
14楼2012-03-22 20:39:52
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quanquanying

新虫 (初入文坛)

请问楼主,你用的酶量是多少啊,切多少的片段。我也要做部分酶切,但是那个软件目前不能免费试用了。求帮助
15楼2013-10-26 13:03:10
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quanquanying

新虫 (初入文坛)

内容已删除
16楼2013-10-26 13:04:48
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