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酶切专家

金虫 (小有名气)

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[求助] 关于EcoRI的部分酶切

我准备用EcoRI+XbaI在我的质粒上克隆外源基因，但酶切验证时发现在质粒上有两个EcoRI位点，所以不得不进行部分酶切。
我的计划是：先用XbaI进行完全酶切，然后加少量EcoRI，进行部分酶切（希望出现只在一个EcoRI位点切开的条带），然后回收在我希望的位点切开的那条带，进行克隆。
我已经尝试了一次，发现即使只酶切5分钟，质粒上的两个EcoRI都全切开了。大家有相关经验吗？

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1楼 2012-03-17 16:51:50

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引用回帖:

10楼: Originally posted by panda73 at 2012-03-18 15:23:09:
我以前做过类似的部分酶切实验：
我得经验如下：
首先必须精确计算所需的酶量。我曾经在小木虫推荐过一个软件（Ｄｏｕｂｌｅ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ　ｄｅｓｉｇｎｅｒ），你可以利用该软件精确计算出ＥｃｏＲＩ的 ...

我这试试。

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