应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNase I酶切实验
91/1返回列表
查看: 1963  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lilirong2009

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DNase I酶切实验

跑了个大肠杆菌和金黄色葡萄球菌基因组DNA，泳道3和4分别是大肠杆菌、金黄色葡萄球菌用DNase I 处理后的电泳图；泳道6和7是肠杆菌基因组DNA；泳道8和9是金黄色葡萄球菌基因组DNA；请问各位高手为什么基因组DNA酶切后电泳图是这样的，酶切不够？大肠杆菌的基因组DNA怎么会跑出这样的条带？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-08-23 19:58:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhixuec

木虫 (著名写手)
★ ★
amisking(金币+2):欢迎分享经验。 2010-08-23 21:00:03
lilirong2009(金币+1): 2010-08-23 21:54:51
那请问你用的是什么内切酶？

我做过很多DNA的酶切实验，从没有见过你这种图片的

从你的图片看，应该DNA没什么问题，可能是酶切时间、内切酶问题等，3号的DNA不纯，点样孔发亮，应该是蛋白，所以说纯度不够
赞一下(1人) 回复此楼
酷爱の族
2楼2010-08-23 20:10:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhixuec

木虫 (著名写手)
通常酶切之后呈现smear状，不会像4号那样还是一条DNA谱带
赞一下 回复此楼
酷爱の族
3楼2010-08-23 20:11:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lilirong2009

铜虫 (小有名气)
我用的是DnaseI ，请问是一片无间断的亮带吗？
赞一下 回复此楼
4楼2010-08-23 21:54:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhixuec

木虫 (著名写手)
lilirong2009(金币+1): 2010-08-27 19:34:50
DnaseI单酶切充分的话泳道呈现弥散带   

EB染色会呈现 就是你说的无间断亮带
EB替代燃料可能要加大胶的浓度，否则亮度会很弱

祝你实验顺利~！
引用回帖:
Originally posted by lilirong2009 at 2010-08-23 21:54:22:
我用的是DnaseI ，请问是一片无间断的亮带吗？

赞一下 回复此楼
酷爱の族
5楼2010-08-24 13:01:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lilirong2009

铜虫 (小有名气)
我们现在就是用EB染色的，亮带很弱看起来像拖尾一样。我加了一种能与DNA相互作用的蛋白之后，基因组DNA就没有被DNaseI 切割，楼上大哥有没有做过DNaseI足迹实验，是不是要求DNA片段大小在300bp之间做足迹实验才比较适合？
赞一下 回复此楼
6楼2010-08-24 14:21:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

微笑漩涡

新虫 (著名写手)
lilirong2009(金币+1): 2010-08-27 19:35:03
楼上说的Smear在DNaseI完全酶切的情况下是不存在的，因为这个酶并不像我们平时

所用的RE，它不具有反响序列识别能力，完全随机切割DNA。所以，若是反应完全，

最后的结果会是10bp左右的条带。

PS：楼主的图跑的真的不敢恭维，一方面没有点marker（至少得用labda DNA、

HidIII），另一方面，不知道你的胶是不是0.8%的，跑的图太丑了。
赞一下 回复此楼
7楼2010-08-24 14:50:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wallace974

木虫 (小有名气)
lilirong2009(金币+1): 2010-08-27 19:34:58
1、lz太粗心了，做琼脂糖电泳都不加个Marker。
2、3,6,7泳道有蛋白或多糖污染，因而密度低，你加样的时候估计样品是飘起来了，有一部分并没有进入胶里，造成拖尾。
3、怀疑你的DNaseI有问题，4和8,9相比根本没有发生酶切，酶切后应该是弥散状，你换一个DNaseI试试，或者基因组浓度、酶切温度、酶切时间看看是不是和说明书上一致，特别是基因组浓度，从图片上看，你的基因组浓度很大。
赞一下 回复此楼
万物一理，万法自然
8楼2010-08-24 14:53:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lilirong2009

铜虫 (小有名气)
谢谢各位前辈的指正啊，不是粗心不加Marker啊，是剩的不多了不敢轻易用完，酶切后是施弥散状还是一个条带啊？谁有图片能否链接一下，谢谢啦！
赞一下 回复此楼
9楼2010-08-24 16:52:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lilirong2009 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +6 白云123456789 2026-04-09 8/400 2026-04-10 21:13 by zhouxiaoyu
[考研] 362求调剂 +10 我要考大 2026-04-06 14/700 2026-04-10 17:00 by luoyongfeng
[考研] 一志愿211 0703化学 346分求调剂 +22 土豆er? 2026-04-09 23/1150 2026-04-10 10:58 by 高维春
[考研] 化学工程调剂289 +42 yang婷 2026-04-07 48/2400 2026-04-10 09:34 by 690616278
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +9 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-09 10/500 2026-04-09 20:01 by Orcid
[考研] 348求调剂 +3 candyyyi 2026-04-09 3/150 2026-04-09 17:20 by 段伟艳
[考研] 考研调剂 +13 冰冰，，， 2026-04-07 13/650 2026-04-09 17:01 by Lilly_Li
[考研] 265求调剂 +4 风说她早忘了 2026-04-07 4/200 2026-04-09 13:59 by only周
[考研] 求调剂 +3 猪肉墩粉条cc 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:05 by 猪肉墩粉条cc
[考研] 一志愿西南大学生物学学硕344 求生物学相关调剂/生物与医药 +7 超人不会飞@ 2026-04-08 7/350 2026-04-09 09:35 by gong120082
[考研] 求调剂 +13 柒luck 2026-04-07 13/650 2026-04-08 22:46 by 猪会飞
[考研] 285求调剂 +20 哦呦呼o 2026-04-04 20/1000 2026-04-08 22:23 by yutian743
[考研] 287求调剂 +6 Fnhc 2026-04-07 6/300 2026-04-08 10:05 by xingguangj
[考研] 求考研材料调剂 +3 材化李可 2026-04-07 3/150 2026-04-08 00:21 by JourneyLucky
[考研] 313求调剂 +3 十六拾陆 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:20 by lbsjt
[考研] 计算机11408 287 求调剂 +3 LiLe5 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:15 by shanqishi
[考研] 302分求调剂 一志愿安徽大学085601 +12 zyx上岸！ 2026-04-04 12/600 2026-04-07 02:09 by BruceLiu320
[考研] 考研调剂 +7 15615482637 2026-04-04 7/350 2026-04-06 22:56 by chenzhimin
[考研] 377求调剂 +6 by.ovo 2026-04-05 6/300 2026-04-05 22:18 by dongzh2009
[考研] 工科277分求调剂材料 +8 上了上了上哦 2026-04-05 9/450 2026-04-05 13:05 by wwytracy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭