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lilirong2009

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DNase I酶切实验

跑了个大肠杆菌和金黄色葡萄球菌基因组DNA,泳道3和4分别是大肠杆菌、金黄色葡萄球菌用DNase I 处理后的电泳图;泳道6和7是肠杆菌基因组DNA;泳道8和9是金黄色葡萄球菌基因组DNA;请问各位高手为什么基因组DNA酶切后电泳图是这样的,酶切不够?大肠杆菌的基因组DNA怎么会跑出这样的条带?

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wallace974

木虫 (小有名气)

lilirong2009(金币+1): 2010-08-27 19:34:58
1、lz太粗心了,做琼脂糖电泳都不加个Marker。
2、3,6,7泳道有蛋白或多糖污染,因而密度低,你加样的时候估计样品是飘起来了,有一部分并没有进入胶里,造成拖尾。
3、怀疑你的DNaseI有问题,4和8,9相比根本没有发生酶切,酶切后应该是弥散状,你换一个DNaseI试试,或者基因组浓度、酶切温度、酶切时间看看是不是和说明书上一致,特别是基因组浓度,从图片上看,你的基因组浓度很大。
万物一理,万法自然
8楼2010-08-24 14:53:13
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zhixuec

木虫 (著名写手)

★ ★
amisking(金币+2):欢迎分享经验。 2010-08-23 21:00:03
lilirong2009(金币+1): 2010-08-23 21:54:51
那请问你用的是什么内切酶?

我做过很多DNA的酶切实验,从没有见过你这种图片的

从你的图片看,应该DNA没什么问题,可能是酶切时间、内切酶问题等,3号的DNA不纯,点样孔发亮,应该是蛋白,所以说纯度不够
酷爱の族
2楼2010-08-23 20:10:21
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zhixuec

木虫 (著名写手)

通常酶切之后呈现smear状,不会像4号那样还是一条DNA谱带
酷爱の族
3楼2010-08-23 20:11:49
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)

我用的是DnaseI ,请问是一片无间断的亮带吗?
4楼2010-08-23 21:54:22
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