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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Sau3A I 不完全酶切
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芥末蚕豆

铜虫 (初入文坛)

[求助] Sau3A I 不完全酶切

Sau3A I 不完全酶切如何酶切出比较大的片段？片段用普通的电泳能跑出来吗？我看好多都是用蔗糖梯度离心后电泳的！
我每次都是2倍梯度稀释！但是不管怎么稀释每次都全碎了！
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开心就好！
1楼 2011-05-20 21:12:44
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yabxxh

木虫 (正式写手)
...，怎么还没有高手出现吗
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2楼2011-05-21 09:32:49
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zmw_520

禁虫 (小有名气)
芥末蚕豆(金币+1): 2011-05-22 11:14:37
本帖内容被屏蔽
3楼2011-05-21 10:30:54
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芥末蚕豆

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zmw_520 at 2011-05-21 10:30:54:
你不完全酶切之后是做什么？我是要做基因组文库，也是不完全酶切，我就开始小量的摸条件，酶切过夜，条件摸好之后就可以大量的切，然后跑普通电泳，回收2K到10K的片段，从你的图上看貌似切碎了，其实可能酶切还不 ...

我是想要比较大一点的条带，大概15k吧！我现在就是小量的摸条件，但是总是这样！切不出比较大的！要么就是切不开，要么就是全碎！
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开心就好！
4楼2011-05-21 19:19:15
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茉莉维尼

新虫 (初入文坛)
小丹木木(金币+5): 新虫回帖，呱唧呱唧!情人节快乐! 2012-02-14 10:49:06
把酶的浓度再降低点啊，我想从10倍开始稀释都行，如果还不行，建议你可以试试BamHI，这个酶要弱点。
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5楼2012-02-14 10:33:33
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他她0328

银虫 (小有名气)
西瓜(金币+1): 鼓励热心交流~节日快乐哈 2012-02-14 16:08:17
你用的酶浓度是多大的，这个酶的作用浓度通常是0.01U/ug，还有控制酶切时间，我提的DNA是链霉菌里的，回收的片段是40K左右的，酶切大概半个小时就可以了，所以酶切时间是要摸索的。别急，一步一步来。祝实验成功！
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6楼2012-02-14 12:49:59
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kabuqinuo89

新虫 (小有名气)
请问楼主现在做的怎么样了？切好了吗 我跟你一样的问题啊
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7楼2012-09-20 21:15:54
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
93426楼: Originally posted by 芥末蚕豆 at 2011-05-20 21:12:44
Sau3A I 不完全酶切如何酶切出比较大的片段？片段用普通的电泳能跑出来吗？我看好多都是用蔗糖梯度离心后电泳的！
我每次都是2倍梯度稀释！但是不管怎么稀释每次都全碎了！
ab/d3/959015_1305897330_496.jpg...

楼主：现在您的问题解决了吗？我和您的问题一样。请问您最后是怎么做的?
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nothing isimpossible
8楼2012-11-14 12:32:31
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
111871楼: Originally posted by zmw_520 at 2011-05-21 10:30:54
你不完全酶切之后是做什么？我是要做基因组文库，也是不完全酶切，我就开始小量的摸条件，酶切过夜，条件摸好之后就可以大量的切，然后跑普通电泳，回收2K到10K的片段，从你的图上看貌似切碎了，其实可能酶切还不完 ...

您好，看见您也是在构建基因文库，我有些关于这个Sau3A酶的酶切问题想请教一下。
1.我在摸索酶的最佳浓度，用的基因组浓度比较高，发现虽然基因片段在我的目标区域内有均匀地弥散，但是在电泳的最下面还是有一些切碎的片段。是不是我的基因组浓度太高了？
2.你电泳时所选用的胶长度是多少厘米？我开始跑的是6cm长得胶，发现有点没跑开，然后换了12cm长得胶，发现条带时跑开了，但是这样胶回收需要切的胶体太大了，影响回收效率，请问您是怎么做的？
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nothing isimpossible
9楼2012-12-05 21:45:53
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可耻的橘子君

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zmw_520 at 2011-05-21 10:30:54
你不完全酶切之后是做什么？我是要做基因组文库，也是不完全酶切，我就开始小量的摸条件，酶切过夜，条件摸好之后就可以大量的切，然后跑普通电泳，回收2K到10K的片段，从你的图上看貌似切碎了，其实可能酶切还不完 ...

您好，我想请教一下，再用Sau3A1做不完全酶切的时候，您用的DNA样本浓度大约是多少？大约酶单位是多少的时候，您回收到了2K到3K左右的片段？谢谢
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10楼2014-08-17 21:54:11
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