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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Sau3A I 不完全酶切
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芥末蚕豆

铜虫 (初入文坛)

[求助] Sau3A I 不完全酶切

Sau3A I 不完全酶切如何酶切出比较大的片段？片段用普通的电泳能跑出来吗？我看好多都是用蔗糖梯度离心后电泳的！
我每次都是2倍梯度稀释！但是不管怎么稀释每次都全碎了！
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开心就好！
1楼 2011-05-20 21:12:44
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
111871楼: Originally posted by zmw_520 at 2011-05-21 10:30:54
你不完全酶切之后是做什么？我是要做基因组文库，也是不完全酶切，我就开始小量的摸条件，酶切过夜，条件摸好之后就可以大量的切，然后跑普通电泳，回收2K到10K的片段，从你的图上看貌似切碎了，其实可能酶切还不完 ...

您好，看见您也是在构建基因文库，我有些关于这个Sau3A酶的酶切问题想请教一下。
1.我在摸索酶的最佳浓度，用的基因组浓度比较高，发现虽然基因片段在我的目标区域内有均匀地弥散，但是在电泳的最下面还是有一些切碎的片段。是不是我的基因组浓度太高了？
2.你电泳时所选用的胶长度是多少厘米？我开始跑的是6cm长得胶，发现有点没跑开，然后换了12cm长得胶，发现条带时跑开了，但是这样胶回收需要切的胶体太大了，影响回收效率，请问您是怎么做的？
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nothing isimpossible
9楼2012-12-05 21:45:53
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yabxxh

木虫 (正式写手)
...，怎么还没有高手出现吗
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2楼2011-05-21 09:32:49
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zmw_520

禁虫 (小有名气)
芥末蚕豆(金币+1): 2011-05-22 11:14:37
本帖内容被屏蔽
3楼2011-05-21 10:30:54
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芥末蚕豆

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zmw_520 at 2011-05-21 10:30:54:
你不完全酶切之后是做什么？我是要做基因组文库，也是不完全酶切，我就开始小量的摸条件，酶切过夜，条件摸好之后就可以大量的切，然后跑普通电泳，回收2K到10K的片段，从你的图上看貌似切碎了，其实可能酶切还不 ...

我是想要比较大一点的条带，大概15k吧！我现在就是小量的摸条件，但是总是这样！切不出比较大的！要么就是切不开，要么就是全碎！
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开心就好！
4楼2011-05-21 19:19:15
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