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芥末蚕豆

铜虫 (初入文坛)

[求助] Sau3A I 不完全酶切

Sau3A I 不完全酶切如何酶切出比较大的片段?片段用普通的电泳能跑出来吗?我看好多都是用蔗糖梯度离心后电泳的!
我每次都是2倍梯度稀释!但是不管怎么稀释每次都全碎了!
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开心就好!
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他她0328

银虫 (小有名气)

西瓜(金币+1): 鼓励热心交流~节日快乐哈 2012-02-14 16:08:17
你用的酶浓度是多大的,这个酶的作用浓度通常是0.01U/ug,还有控制酶切时间,我提的DNA是链霉菌里的,回收的片段是40K左右的,酶切大概半个小时就可以了,所以酶切时间是要摸索的。别急,一步一步来。祝实验成功!
6楼2012-02-14 12:49:59
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yabxxh

木虫 (正式写手)

...,怎么还没有高手出现吗
2楼2011-05-21 09:32:49
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zmw_520

禁虫 (小有名气)

芥末蚕豆(金币+1): 2011-05-22 11:14:37
本帖内容被屏蔽

3楼2011-05-21 10:30:54
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芥末蚕豆

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by zmw_520 at 2011-05-21 10:30:54:
你不完全酶切之后是做什么?我是要做基因组文库,也是不完全酶切,我就开始小量的摸条件,酶切过夜,条件摸好之后就可以大量的切,然后跑普通电泳,回收2K到10K的片段,从你的图上看貌似切碎了,其实可能酶切还不 ...

我是想要比较大一点的条带,大概15k吧!我现在就是小量的摸条件,但是总是这样!切不出比较大的!要么就是切不开,要么就是全碎!
开心就好!
4楼2011-05-21 19:19:15
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