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lilirong2009

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DNase I酶切实验

跑了个大肠杆菌和金黄色葡萄球菌基因组DNA,泳道3和4分别是大肠杆菌、金黄色葡萄球菌用DNase I 处理后的电泳图;泳道6和7是肠杆菌基因组DNA;泳道8和9是金黄色葡萄球菌基因组DNA;请问各位高手为什么基因组DNA酶切后电泳图是这样的,酶切不够?大肠杆菌的基因组DNA怎么会跑出这样的条带?

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微笑漩涡

新虫 (著名写手)

lilirong2009(金币+1): 2010-08-27 19:35:03
楼上说的Smear在DNaseI完全酶切的情况下是不存在的,因为这个酶并不像我们平时

所用的RE,它不具有反响序列识别能力,完全随机切割DNA。所以,若是反应完全,

最后的结果会是10bp左右的条带。

PS:楼主的图跑的真的不敢恭维,一方面没有点marker(至少得用labda DNA、

HidIII),另一方面,不知道你的胶是不是0.8%的,跑的图太丑了。
7楼2010-08-24 14:50:38
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zhixuec

木虫 (著名写手)

★ ★
amisking(金币+2):欢迎分享经验。 2010-08-23 21:00:03
lilirong2009(金币+1): 2010-08-23 21:54:51
那请问你用的是什么内切酶?

我做过很多DNA的酶切实验,从没有见过你这种图片的

从你的图片看,应该DNA没什么问题,可能是酶切时间、内切酶问题等,3号的DNA不纯,点样孔发亮,应该是蛋白,所以说纯度不够
酷爱の族
2楼2010-08-23 20:10:21
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zhixuec

木虫 (著名写手)

通常酶切之后呈现smear状,不会像4号那样还是一条DNA谱带
酷爱の族
3楼2010-08-23 20:11:49
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)

我用的是DnaseI ,请问是一片无间断的亮带吗?
4楼2010-08-23 21:54:22
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