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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】不完全酶切
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匿名

用户注销 (著名写手)
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1楼 2011-01-01 11:04:45
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★
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1949stone(金币+1):谢谢交流 2011-01-01 22:35:17
遇到这种情况也只能重新更换载体了。酶切的话肯定是两个酶切位点都会被切开的！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-01-01 13:22:37
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2011-01-02 13:18:29
部分酶切也是随机的呀~你想想其他的解决方案吧
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2楼2011-01-01 12:58:59
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+3):good 2011-01-01 21:18:56
这个可以做的，叫partial digest。就是控制酶用量和酶切时间，我一般酶用量用1/10，时间可以用5，10，15分钟，时间到了加loading buffer放冰上终止，这个实验是分子克隆的较难的，因为条件必须自己摸索，与质粒质量，酶效率有关（比如NotI只和用量有关，和基本时间无关）。
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4楼2011-01-01 15:42:01
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
当然前提是你所需要的片段能和其他可能出现的片段可以电泳区分开来
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5楼2011-01-01 16:03:00
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