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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教一下大家的酶切时间是多久
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zj408694018

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请教一下大家的酶切时间是多久 已有8人参与

各位，请教一下大家的双酶切的酶切时间是多久，还有就是连接时候载体和片段加多少啊，我最近连接很不顺利，挑菌落后做PCR能做出来，然后再双酶切却又没有目的带
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1楼 2010-08-04 12:38:02
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gagalady

新虫 (正式写手)
★ ★
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看天(金币+1):鼓励 2010-08-04 14:22:23
恩  酶切时间不一定呀   2h  4h  时间更长有的是
你可以进宝生物的网站  去下载你所用酶的说明书看看
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2楼2010-08-04 12:50:52
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dcb005

金虫 (著名写手)
★
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酶切3h
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★穷则独善其身,达则兼济天下★
3楼2010-08-04 13:32:51
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bunny0512

银虫 (小有名气)
★ ★
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看天(金币+1):鼓励 2010-08-04 14:22:39
37℃ 双酶切4h 或过夜     具体要参照产品手册
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在哪里~在哪里见过你~
4楼2010-08-04 14:01:42
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cheo163

金虫 (小有名气)
★
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我用1.5h切过质粒，4h切过载体，6-8h切过pcr产物
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5楼2010-08-04 14:51:28
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月月大可

木虫 (著名写手)
一般的鉴定2-4h，如果想确定充分一些也过夜切过。
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6楼2010-08-04 18:13:39
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xiangyu238

铜虫 (初入文坛)
★ ★
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amisking(金币+1):good！ 2010-08-04 20:42:17
看体系吧，我一般10微升37℃切2小时，DNA和质粒均可切开，
100微升体系切3小时。
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7楼2010-08-04 20:25:15
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cpu2004

金虫 (小有名气)
看酶和体系，一般我会用低于最适温度2到3度酶切过夜，其中加的酶量也是推荐的1/2，
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8楼2010-08-04 23:18:59
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谁伴我闯荡

至尊木虫 (著名写手)
★
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如果效率高的话最适温度酶切三小时足够了，过夜可能出现非特异性位点的切割。如果效率低一点的话，可以延长时间，比如没有共用Buffer等问题。我一般都是50微升体系切的，按照推荐的20微升也可以，3小时切出来电泳都很干净的
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此生愿为扑火蛾，纵是焚化亦无悔
9楼2010-08-05 07:34:04
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