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lxyyzz

木虫 (小有名气)

[求助] 求助关于双酶切空载跑胶没有条带!

空载PGEX-4T-1,酶切用量2微克
用NEB公司的BamHI和EcoRI酶切,酶切体系50微升
尝试两种酶同时酶切以及单酶切
酶切时间6h,4h,3h,1.5h都试过
酶切之后所有样品全部上样电泳
酶切之间的空载可以跑出条带,但是酶切之后,无论是单酶切还是双酶切都看不到一点条带

有没有哪位童鞋遇到过类似的问题?求高人指点~
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lxyyzz

木虫 (小有名气)

补充下:电泳的时候,同时跑了酶切前的载体和进行双酶切的目标片段,都正常,只有载体酶切看不到条带。

求高手指教啊!
2楼2012-07-10 20:06:51
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j2

木虫 (正式写手)

50ul全部上样式怎么上的?
修炼ing,当虫仙……
3楼2012-07-10 22:42:16
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lxyyzz

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by j2 at 2012-07-10 22:42:16
50ul全部上样式怎么上的?

直接加入5ul 10Xloading 混合,都点到孔里电泳啊
4楼2012-07-10 23:57:35
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cuimao513

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

5楼2012-07-11 01:27:48
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jinfangli

铜虫 (小有名气)

我也想知道为什么,高人指点
fight
6楼2012-07-11 08:24:46
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lxyyzz

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cuimao513 at 2012-07-11 01:27:48
你的质粒是从什么菌里提出来的?

E.coli DH5a 我也在怀疑是不是提的质粒有问题
7楼2012-07-11 08:42:25
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lixingliang

新虫 (小有名气)

确实没遇到这种情况
我不管你看起看不起我,我都是个演员
8楼2012-07-11 10:24:35
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lxyyzz: 金币+2, 有帮助, 就是因为转化后长不出克隆,我才酶切后跑胶鉴定想看看问题出在哪里,以前做也不跑胶的。还是非常感谢! 2012-07-11 14:20:04
是量的问题吧,酶切体系后质粒的量少了吧~我们一般切完不跑的,都是等转完DH5a后再提质粒再双酶切验证的。
我会绕一个圈,走回到实验室
9楼2012-07-11 13:05:40
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by loveskyzhou at 2012-07-11 13:05:40
是量的问题吧,酶切体系后质粒的量少了吧~我们一般切完不跑的,都是等转完DH5a后再提质粒再双酶切验证的。

那可能就是没有连上吧,我最近也总连不上,一起祈祷啊。。。。
我会绕一个圈,走回到实验室
10楼2012-07-11 21:18:28
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