应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助关于双酶切空载跑胶没有条带！
161/2返回列表12下一页
查看: 4297  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lxyyzz

木虫 (小有名气)

[求助] 求助关于双酶切空载跑胶没有条带！

空载PGEX-4T-1，酶切用量2微克
用NEB公司的BamHI和EcoRI酶切，酶切体系50微升
尝试两种酶同时酶切以及单酶切
酶切时间6h,4h,3h,1.5h都试过
酶切之后所有样品全部上样电泳
酶切之间的空载可以跑出条带，但是酶切之后，无论是单酶切还是双酶切都看不到一点条带

有没有哪位童鞋遇到过类似的问题？求高人指点~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-10 19:50:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxyyzz

木虫 (小有名气)
补充下：电泳的时候，同时跑了酶切前的载体和进行双酶切的目标片段，都正常，只有载体酶切看不到条带。

求高手指教啊！
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-10 20:06:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)
50ul全部上样式怎么上的？
赞一下 回复此楼
修炼ｉｎｇ，当虫仙……
3楼2012-07-10 22:42:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxyyzz

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by j2 at 2012-07-10 22:42:16
50ul全部上样式怎么上的？

直接加入5ul 10Xloading 混合，都点到孔里电泳啊
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-10 23:57:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cuimao513

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
5楼2012-07-11 01:27:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinfangli

铜虫 (小有名气)
我也想知道为什么，高人指点
赞一下 回复此楼
fight
6楼2012-07-11 08:24:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxyyzz

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cuimao513 at 2012-07-11 01:27:48
你的质粒是从什么菌里提出来的？

E.coli DH5a 我也在怀疑是不是提的质粒有问题
赞一下 回复此楼
7楼2012-07-11 08:42:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixingliang

新虫 (小有名气)
确实没遇到这种情况
赞一下 回复此楼
我不管你看起看不起我，我都是个演员
8楼2012-07-11 10:24:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lxyyzz: 金币+2, ★有帮助, 就是因为转化后长不出克隆，我才酶切后跑胶鉴定想看看问题出在哪里，以前做也不跑胶的。还是非常感谢！ 2012-07-11 14:20:04
是量的问题吧，酶切体系后质粒的量少了吧~我们一般切完不跑的，都是等转完DH5a后再提质粒再双酶切验证的。
赞一下 回复此楼
我会绕一个圈，走回到实验室
9楼2012-07-11 13:05:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by loveskyzhou at 2012-07-11 13:05:40
是量的问题吧，酶切体系后质粒的量少了吧~我们一般切完不跑的，都是等转完DH5a后再提质粒再双酶切验证的。

那可能就是没有连上吧，我最近也总连不上，一起祈祷啊。。。。
赞一下 回复此楼
我会绕一个圈，走回到实验室
10楼2012-07-11 21:18:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lxyyzz 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-28 09:33 by winsaint
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+5) +11 晴天加油 2026-08-26 12/600 2026-08-28 01:22 by li09465290@
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +7 苏东坡二世 2026-08-23 7/350 2026-08-27 18:14 by 瞬息宇宙
[基金申请] 基金不中，共勉 +10 eulota 2026-08-26 10/500 2026-08-27 17:23 by lqllinqiaoli
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭