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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助关于双酶切空载跑胶没有条带！
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咩咩89

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lxyyzz: 金币+2, ★有帮助, 谢谢回复~ 2012-07-13 08:57:09
你提出质粒之后最好先检测一下质粒的质量如何，先确定有质粒，再酶切呀，而且酶切下来，小片段可能会很浅
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11楼2012-07-11 21:40:05
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cuimao513

禁虫 (小有名气)
★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-12 13:56:50
本帖内容被屏蔽
12楼2012-07-12 12:43:07
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lxyyzz

木虫 (小有名气)
我想我知道答案了。虽然跑胶看起来质粒是正常的，但还是质粒的问题
目前怀疑是质粒试剂盒的问题，或者是我操作的问题，或者载体的菌株可能是表达菌株，提出的质粒里面有很多DNA酶
我用其他同学以前提的同一载体同样的量酶切2h后跑胶鉴定，条带很明显
谢谢大家的帮助！
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13楼2012-07-13 09:00:57
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jiangyinshen

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lxyyzz: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢回复~ 2012-09-22 08:53:25
质粒浓度偏低，建议转化后小提中量，双酶切过夜，再跑电泳，同时确保你的EB是好用的，还有凝胶成像系统完全正常
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不是風動，亦非幡動，仁者心動
14楼2012-09-21 10:54:39
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自由如风笑

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lxyyzz: 金币+5, ★★★很有帮助, 虽然不是这个问题，还是谢谢了！ 2012-11-24 10:08:20
考虑原因：1.2ug不需要50ul体系酶切，一般20ul即可，酶稍微加量不影响结果。
2.上样时确保样品全部加入孔中，Loading Buffer过少会导致样品溢出，导致看不到酶切后的样品；
3.不酶切的有条带，酶切后的没有条带，还是考虑2的原因，仔细确认。
4.凝胶电泳时确保胶处于水平面，有效孔体积要明显大于加样体系，
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15楼2012-11-23 13:57:03
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cmy201051850

新虫 (初入文坛)
我现在也正在遇到这种问题  你现在解决了吗
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16楼2016-06-16 12:46:39
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