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lxyyzz

木虫 (小有名气)

[求助] 求助关于双酶切空载跑胶没有条带!

空载PGEX-4T-1,酶切用量2微克
用NEB公司的BamHI和EcoRI酶切,酶切体系50微升
尝试两种酶同时酶切以及单酶切
酶切时间6h,4h,3h,1.5h都试过
酶切之后所有样品全部上样电泳
酶切之间的空载可以跑出条带,但是酶切之后,无论是单酶切还是双酶切都看不到一点条带

有没有哪位童鞋遇到过类似的问题?求高人指点~
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jiangyinshen

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lxyyzz: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢回复~ 2012-09-22 08:53:25
质粒浓度偏低,建议转化后小提中量,双酶切过夜,再跑电泳,同时确保你的EB是好用的,还有凝胶成像系统完全正常
不是風動,亦非幡動,仁者心動
14楼2012-09-21 10:54:39
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lxyyzz

木虫 (小有名气)

补充下:电泳的时候,同时跑了酶切前的载体和进行双酶切的目标片段,都正常,只有载体酶切看不到条带。

求高手指教啊!
2楼2012-07-10 20:06:51
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j2

木虫 (正式写手)

50ul全部上样式怎么上的?
修炼ing,当虫仙……
3楼2012-07-10 22:42:16
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lxyyzz

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by j2 at 2012-07-10 22:42:16
50ul全部上样式怎么上的?

直接加入5ul 10Xloading 混合,都点到孔里电泳啊
4楼2012-07-10 23:57:35
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