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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切后，质粒条带弥散
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JICK159

木虫 (正式写手)

[求助] 双酶切后，质粒条带弥散 已有3人参与

载体是别人赠送的，上面连有目的基因，我对其进行双酶切后，目的基因是清晰的，但是质粒却是弥散的，从质粒大小弥散到接近目的基因处。

[ Last edited by silicare on 2014-3-21 at 10:47 ]
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1楼 2014-03-21 09:22:56
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
★ ★
JICK159(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 19:43:34
可能酶切条件不合适，温度不适宜是一个原因
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
2楼2014-03-21 10:22:36
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by JICK159 at 2014-03-21 12:30:58
pstI HindIII 37° buffer R 应该没问题吧？...

你确定你水浴锅的温度一定是37吗？其次看看是否要改变一下体系各成分的量，建议而已哈
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
4楼2014-03-21 13:40:08
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普通回帖

JICK159

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-21 10:22:36
可能酶切条件不合适，温度不适宜是一个原因

pstI HindIII 37° buffer R 应该没问题吧？
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3楼2014-03-21 12:30:58
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
pstI HindIII 37° buffer R可以共切吗
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5楼2014-03-21 14:34:05
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c_jade

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果做几次都这样，不如重新转化提取再酶切？
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6楼2014-03-21 15:01:05
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JICK159

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-21 13:40:08
你确定你水浴锅的温度一定是37吗？其次看看是否要改变一下体系各成分的量，建议而已哈...

谢谢啊
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7楼2014-03-21 16:02:07
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JICK159

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-21 14:34:05
pstI HindIII 37° buffer R可以共切吗

是的，目的基因很好，就是载体不行
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8楼2014-03-21 16:02:40
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JICK159

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by c_jade at 2014-03-21 15:01:05
如果做几次都这样，不如重新转化提取再酶切？

我已经做了30多次了，质粒提了不下50管
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9楼2014-03-21 16:03:14
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by JICK159 at 2014-03-21 16:02:40
是的，目的基因很好，就是载体不行...

我也出现过这种情况，听师兄说是切过了。
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10楼2014-03-21 16:04:35
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