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cjf-88

银虫 (初入文坛)

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[求助] Not I/BamH I双酶切体系缓冲液的选择问题

如题，查了Takara中Double Digestion(双酶切反应)时Universal Buffer(通用缓冲液)的使用表，Not I/BamH I双酶切体系通用缓冲液为：0.5×K+BSA，Not I 酶一般反应体系中的0.1% TritonX-100还用不用加？假如在20μl反应体系中，有10×K Buffer，0.1% BSA ，0.1% TritonX-100，各试剂应加多少量？
麻烦大家了！

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1楼 2013-04-20 19:17:51

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求帮助啊！谢谢大家了！

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2楼2013-04-21 16:04:27

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senix

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-22 08:49:34
cjf-88: 金币+5, ★有帮助, 谢谢 2013-04-28 23:25:39

不用加，直接用Universal Buffer(通用缓冲液)，不用加0.1% TritonX-100！

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3楼2013-04-21 21:21:45

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3楼: Originally posted by senix at 2013-04-21 21:21:45
不用加，直接用Universal Buffer(通用缓冲液)，不用加0.1% TritonX-100！

谢谢！请问20μl反应体系中10×K Buffer是加1μl吧？那0.1% BSA 是加2μl还是1μl?

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4楼2013-04-21 22:28:25

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4楼: Originally posted by cjf-88 at 2013-04-21 22:28:25
谢谢！请问20μl反应体系中10×K Buffer是加1μl吧？那0.1% BSA 是加2μl还是1μl?...

20ul体系中，10x buffer加2ul， 0.1%的BSA加0.5ul

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5楼2013-04-22 08:38:53

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5楼: Originally posted by senix at 2013-04-22 08:38:53
20ul体系中，10x buffer加2ul， 0.1%的BSA加0.5ul...

BSA加的量不是很理解，下面第一个图是Not I 说明书中的一般反应体系，第二个图是Double Digestion(双酶切反应)时Universal Buffer(通用缓冲液)的使用表中的一段说明：

这个体系内10x buffer加2ul是将buffer稀释了10倍吧？Not I/BamH I双酶切体系通用缓冲液为：0.5×K+BSA，那么终浓度为0.5×时稀释至20倍不是加1μl吗？BSA加的量我就不知道用不用也一样稀释至20倍？不知道我理解的对不对？

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6楼2013-04-22 17:58:35

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