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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问Not I的酶切效率怎样，过夜酶切都没切开！！
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

[求助] 请问Not I的酶切效率怎样，过夜酶切都没切开！！

我用的是TAKARA的，还特意加大酶量到1ul，质粒只加了2ul，与BamH I 按说明书加缓冲液过夜切都没切开！今天单独单酶切一下，6小时后跑电泳看了一下，BamH I都切干净了，Not I没切开……有人用过这个酶切麽，请问效率如何……我现在在怀疑是不是我扩增出来的目的片段有问题
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1楼 2012-07-03 21:29:14
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dragon1971

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-04 13:55:38
用过，效率不如BamHI，但也是能切开的，可以扩大一下反应休体系试试看。要是引物设计没有问题的话，扩增出来的目的片段一般没有问题，但也不排除非特异性扩增。
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2楼2012-07-03 21:40:01
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congenial

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
NotI 切超螺旋效率不好。但是能切开。有条件的话限制酶还是买NEB的。
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3楼2012-07-04 05:02:09
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测序看看酶切位点有无突变，另外不要用错buffer
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相信自己
4楼2012-07-04 08:41:00
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和一

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是重组质粒吗？我昨天用的NEB的NotI  h和 Ecor I 双酶切重组质粒，效果很好啊，只用1个小时就切开了。
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5楼2012-07-04 10:20:44
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer
引用回帖:
5楼: Originally posted by 和一 at 2012-07-04 10:20:44
是重组质粒吗？我昨天用的NEB的NotI  h和 Ecor I 双酶切重组质粒，效果很好啊，只用1个小时就切开了。

是重组质粒，我的是TAKARA的，不行啊，头疼.没切开.
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6楼2012-07-04 12:23:19
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jimjohntall

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我之前用N0TⅠ切过质粒，过夜可以切的下来的。若没有切开有可能是你的片段不干净有污染。
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7楼2012-07-04 12:39:51
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer
引用回帖:
7楼: Originally posted by jimjohntall at 2012-07-04 12:39:51
我之前用N0TⅠ切过质粒，过夜可以切的下来的。若没有切开有可能是你的片段不干净有污染。

行，我再试试
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8楼2012-07-04 13:23:11
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limin2012

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切效果很好，可能是你的体系不对。双酶切是的体系成分与单酶切不同，有的需要特别添加某些成分。
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9楼2012-07-04 13:47:17
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shxteacher

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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对于NotI，采用分步酶切5-6h，就可以取得好的效果
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OMG
10楼2012-07-05 21:20:59
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