应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：Xho 1 单酶切 载体连接
201/2返回列表12下一页
查看: 3694  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

匿名

用户注销 (小有名气)
本帖仅楼主可见

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-06-25 00:30:53
已阅   同方向广播   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR产物连T载体，再切下来，回收，再连接。载体：2ul(约0.03pmol)，片段：4ul(约0.003pmol)，这个mol比到1:3么？加大片段的量啊
赞一下(1人) 回复此楼
相信自己
2楼2012-06-25 08:37:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ruobing_008

新虫 (小有名气)
我觉得单酶切比双酶切难
赞一下(1人) 回复此楼
17楼2012-10-18 16:43:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘仁坤2013

新虫 (小有名气)
引物上设计XHO1的酶切位点，进行PCR，把PCR产物和全式金公司的pEASY-T1 Simple载体连接，然后在用XHO1切割重组的质粒，跑胶，回收目的片段。这样得到的片段肯定是被XHO1酶切过的了。若不进行TA克隆，直接切割PCR产物，你不能确定其是否被XHO1酶切。
赞一下(1人) 回复此楼
19楼2013-06-18 15:13:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
本帖仅楼主可见
3楼2012-06-25 12:59:51
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

陈朵朵

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-25 13:46:38
之前我们实验室做简单的T载体连接，做了半个月也一直连不上，后来把T载体换了新的，T4连接酶也换了之后就连上了。你看是不是你们的T载体污染了，一般T载体连接效率是很高的，跟mol比没有太大的关系，1:3 到1:10基本上没什么区别。
赞一下 回复此楼
4楼2012-06-25 13:04:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by nxtaoxu at 2012-06-25 12:59:51
有，都1:10了。...

你是片段：载体=1：10啊？要载体：片段=1：10
赞一下 回复此楼
相信自己
5楼2012-06-25 14:10:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
本帖仅楼主可见
赞一下
6楼2012-06-25 14:18:16
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

zhqu1234

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能xhoI有外切酶污染，推荐换管酶试试。我之前有个载体构建了三个月都连接不上，换了另一个公司的内切酶一次就连上了。
赞一下 回复此楼
7楼2012-06-25 19:21:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zw198626

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助，很热心哦 2012-06-26 16:38:52
nxtaoxu: 金币+5 2012-10-18 16:46:59
建议两点：
1.看看Xho I说明书，fermentas酶切位点是不是要当平末端来做连接（Takara的是这么个情况）？
2.质粒验证还是对的？
3.抗性还对？
4.该质粒在大肠杆菌中是否有泄漏表达，而表达该蛋白对大肠杆菌有细胞毒性？
赞一下 回复此楼
8楼2012-06-25 20:32:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
一般不会是链接时候的问题，估计是前面酶切的时候出问题了，换家公司的内切酶试试吧。
赞一下 回复此楼
9楼2012-06-26 13:42:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
本帖仅楼主可见
赞一下
10楼2012-06-26 14:10:16
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
相关版块跳转 我要订阅楼主 nxtaoxu 的主题更新
201/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 5/250 2026-09-17 05:14 by k06BKNblrGRH
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-17 04:52 by k06BKNblrGRH
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-17 03:16 by Tql5LQhh5rLK
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 6/300 2026-09-17 02:38 by Tql5LQhh5rLK
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 i3KBRD19ERkG 2026-09-16 3/150 2026-09-17 00:50 by Tql5LQhh5rLK
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 yaCh4X3wd045 2026-09-14 3/150 2026-09-16 20:39 by MHf40yA0Uhyb
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-16 20:38 by MHf40yA0Uhyb
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-16 16:12 by i3KBRD19ERkG
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-16 15:48 by i3KBRD19ERkG
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 4/200 2026-09-16 06:36 by LH5NkK5Ud4bh
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 05:15 by LH5NkK5Ud4bh
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 03:50 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-16 02:50 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-16 02:23 by DgNGHc3h5tPl
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-16 02:14 by DgNGHc3h5tPl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:59 by CgyNCDVNhGVg
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:50 by 5BDX0d0WFp7t
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[基金申请] 求教各位大神：2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀？ +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭