应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：Xho 1 单酶切 载体连接
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
201/2返回列表12下一页
查看: 3206  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

匿名

用户注销 (小有名气)
本帖仅楼主可见

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-06-25 00:30:53
已阅   同方向广播   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR产物连T载体，再切下来，回收，再连接。载体：2ul(约0.03pmol)，片段：4ul(约0.003pmol)，这个mol比到1:3么？加大片段的量啊
赞一下(1人) 回复此楼
相信自己
2楼2012-06-25 08:37:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ruobing_008

新虫 (小有名气)
我觉得单酶切比双酶切难
赞一下(1人) 回复此楼
17楼2012-10-18 16:43:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘仁坤2013

新虫 (小有名气)
引物上设计XHO1的酶切位点，进行PCR，把PCR产物和全式金公司的pEASY-T1 Simple载体连接，然后在用XHO1切割重组的质粒，跑胶，回收目的片段。这样得到的片段肯定是被XHO1酶切过的了。若不进行TA克隆，直接切割PCR产物，你不能确定其是否被XHO1酶切。
赞一下(1人) 回复此楼
19楼2013-06-18 15:13:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
本帖仅楼主可见
3楼2012-06-25 12:59:51
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

陈朵朵

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-25 13:46:38
之前我们实验室做简单的T载体连接，做了半个月也一直连不上，后来把T载体换了新的，T4连接酶也换了之后就连上了。你看是不是你们的T载体污染了，一般T载体连接效率是很高的，跟mol比没有太大的关系，1:3 到1:10基本上没什么区别。
赞一下 回复此楼
4楼2012-06-25 13:04:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by nxtaoxu at 2012-06-25 12:59:51
有，都1:10了。...

你是片段：载体=1：10啊？要载体：片段=1：10
赞一下 回复此楼
相信自己
5楼2012-06-25 14:10:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
本帖仅楼主可见
赞一下
6楼2012-06-25 14:18:16
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

zhqu1234

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能xhoI有外切酶污染，推荐换管酶试试。我之前有个载体构建了三个月都连接不上，换了另一个公司的内切酶一次就连上了。
赞一下 回复此楼
7楼2012-06-25 19:21:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zw198626

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助，很热心哦 2012-06-26 16:38:52
nxtaoxu: 金币+5 2012-10-18 16:46:59
建议两点：
1.看看Xho I说明书，fermentas酶切位点是不是要当平末端来做连接（Takara的是这么个情况）？
2.质粒验证还是对的？
3.抗性还对？
4.该质粒在大肠杆菌中是否有泄漏表达，而表达该蛋白对大肠杆菌有细胞毒性？
赞一下 回复此楼
8楼2012-06-25 20:32:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
一般不会是链接时候的问题，估计是前面酶切的时候出问题了，换家公司的内切酶试试吧。
赞一下 回复此楼
9楼2012-06-26 13:42:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
本帖仅楼主可见
赞一下
10楼2012-06-26 14:10:16
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
相关版块跳转 我要订阅楼主 nxtaoxu 的主题更新
201/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703总分331求调剂 +12 ZY-05 2026-04-04 16/800 2026-04-06 17:54 by lijunpoly
[考研] 0703化学 +9 goldtt 2026-04-02 11/550 2026-04-06 10:35 by 无际的草原
[考研] 求调剂求调剂 +8 121. 2026-04-02 8/400 2026-04-05 20:15 by lys0704
[考研] 一志愿北京交通大学材料工程总分358求调剂 +4 cs0106 2026-04-04 4/200 2026-04-05 18:46 by imissbao
[考研] 085600调剂 +9 东照照照 2026-04-04 9/450 2026-04-05 13:44 by ujn_zhuj
[考研] 数一英一274机械调剂 +5 星陨流霞 2026-04-04 6/300 2026-04-05 11:38 by arrow8852
[考研] 材料调剂 +15 一样YWY 2026-04-01 15/750 2026-04-04 22:23 by hemengdong
[论文投稿] 求文献 5+3 ys879651$ 2026-04-02 3/150 2026-04-04 17:22 by bobvan
[考研] 一志愿北京科技大学材料工程085601，求调剂 +17 cdyw 2026-04-02 18/900 2026-04-04 11:14 by w_xuqing
[考研] 材料调剂 +11 吴棂颖！ 2026-04-03 11/550 2026-04-04 09:56 by 小小树2024
[考研] 283分材料与化工求调剂 +29 罗KAKA 2026-04-02 29/1450 2026-04-03 23:56 by userper
[考研] 320调剂 +4 农业工程与信息� 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:40 by lbsjt
[考研] 085600，320分求调剂 +6 大馋小子 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:54 by dongzh2009
[考研] 求调剂 +7 Aniyaio 2026-04-02 7/350 2026-04-02 16:42 by zzsw+
[考研] 346求调剂 +5 郑诚乐 2026-04-02 5/250 2026-04-02 16:38 by SZW_UJN
[考研] 314求调剂 +11 1xiaojun23 2026-03-31 12/600 2026-04-02 12:31 by 1xiaojun23
[考研] 272求调剂，接受跨专业调剂！ +4 闲鱼卢 2026-03-31 4/200 2026-04-02 11:18 by guyan1000
[考研] 考研调剂 +12 Amber00 2026-03-31 12/600 2026-04-02 09:04 by sanrepian
[考研] 材料专业调剂 +5 啦啦啦哭 2026-03-31 6/300 2026-04-01 16:48 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 生物学 377分 +6 zzll03 2026-03-31 6/300 2026-03-31 17:33 by 唐沐儿
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭