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匿名

用户注销 (小有名气)

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刘仁坤2013

新虫 (小有名气)

引物上设计XHO1的酶切位点,进行PCR,把PCR产物和全式金公司的pEASY-T1 Simple载体连接,然后在用XHO1切割重组的质粒,跑胶,回收目的片段。这样得到的片段肯定是被XHO1酶切过的了。若不进行TA克隆,直接切割PCR产物,你不能确定其是否被XHO1酶切。
19楼2013-06-18 15:13:28
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l68266152

银虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
PCR产物连T载体,再切下来,回收,再连接。载体:2ul(约0.03pmol),片段:4ul(约0.003pmol),这个mol比到1:3么?加大片段的量啊
相信自己
2楼2012-06-25 08:37:29
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匿名

用户注销 (小有名气)

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3楼2012-06-25 12:59:51
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陈朵朵

银虫 (初入文坛)

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★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-25 13:46:38
之前我们实验室做简单的T载体连接,做了半个月也一直连不上,后来把T载体换了新的,T4连接酶也换了之后就连上了。你看是不是你们的T载体污染了,一般T载体连接效率是很高的,跟mol比没有太大的关系,1:3 到1:10基本上没什么区别。
4楼2012-06-25 13:04:44
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