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匿名

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zw198626

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助,很热心哦 2012-06-26 16:38:52
nxtaoxu: 金币+5 2012-10-18 16:46:59
建议两点:
1.看看Xho I说明书,fermentas酶切位点是不是要当平末端来做连接(Takara的是这么个情况)?
2.质粒验证还是对的?
3.抗性还对?
4.该质粒在大肠杆菌中是否有泄漏表达,而表达该蛋白对大肠杆菌有细胞毒性?
8楼2012-06-25 20:32:39
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR产物连T载体,再切下来,回收,再连接。载体:2ul(约0.03pmol),片段:4ul(约0.003pmol),这个mol比到1:3么?加大片段的量啊
相信自己
2楼2012-06-25 08:37:29
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匿名

用户注销 (小有名气)

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3楼2012-06-25 12:59:51
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陈朵朵

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-25 13:46:38
之前我们实验室做简单的T载体连接,做了半个月也一直连不上,后来把T载体换了新的,T4连接酶也换了之后就连上了。你看是不是你们的T载体污染了,一般T载体连接效率是很高的,跟mol比没有太大的关系,1:3 到1:10基本上没什么区别。
4楼2012-06-25 13:04:44
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