24小时热门版块排行榜    

查看: 4181  |  回复: 17

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

[求助] 请问Not I的酶切效率怎样,过夜酶切都没切开!!

我用的是TAKARA的,还特意加大酶量到1ul,质粒只加了2ul,与BamH I 按说明书加缓冲液过夜切都没切开!今天单独单酶切一下,6小时后跑电泳看了一下,BamH I都切干净了,Not I没切开……有人用过这个酶切麽,请问效率如何……我现在在怀疑是不是我扩增出来的目的片段有问题
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dragon1971

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-04 13:55:38
用过,效率不如BamHI,但也是能切开的,可以扩大一下反应休体系试试看。要是引物设计没有问题的话,扩增出来的目的片段一般没有问题,但也不排除非特异性扩增。
2楼2012-07-03 21:40:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

congenial

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
NotI 切超螺旋效率不好。但是能切开。有条件的话限制酶还是买NEB的。
3楼2012-07-04 05:02:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
测序看看酶切位点有无突变,另外不要用错buffer
相信自己
4楼2012-07-04 08:41:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

和一

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是重组质粒吗?我昨天用的NEB的NotI  h和 Ecor I 双酶切重组质粒,效果很好啊,只用1个小时就切开了。
5楼2012-07-04 10:20:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

引用回帖:
5楼: Originally posted by 和一 at 2012-07-04 10:20:44
是重组质粒吗?我昨天用的NEB的NotI  h和 Ecor I 双酶切重组质粒,效果很好啊,只用1个小时就切开了。

是重组质粒,我的是TAKARA的,不行啊,头疼.没切开.
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
6楼2012-07-04 12:23:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jimjohntall

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我之前用N0TⅠ切过质粒,过夜可以切的下来的。若没有切开有可能是你的片段不干净有污染。
7楼2012-07-04 12:39:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

引用回帖:
7楼: Originally posted by jimjohntall at 2012-07-04 12:39:51
我之前用N0TⅠ切过质粒,过夜可以切的下来的。若没有切开有可能是你的片段不干净有污染。

行,我再试试
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
8楼2012-07-04 13:23:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

limin2012

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
酶切效果很好,可能是你的体系不对。双酶切是的体系成分与单酶切不同,有的需要特别添加某些成分。
9楼2012-07-04 13:47:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shxteacher

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
对于NotI,采用分步酶切5-6h,就可以取得好的效果
OMG
10楼2012-07-05 21:20:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Marado 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +55 医学老男孩 2026-08-13 123/6150 2026-08-19 23:44 by stan_et
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +13 kkkl_v 2026-08-19 13/650 2026-08-19 22:37 by 宝贝虫子
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +12 基诺咪客 2026-08-17 16/800 2026-08-19 22:04 by kk 的小木虫
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见