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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问Not I的酶切效率怎样，过夜酶切都没切开！！
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果子么么茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加了百分之一的BSA 和Trition 效果可以
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11楼2012-07-05 21:50:07
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cinsy

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼上正解，最近试了Fermentas的NotI快速内切酶，效果也很不错。
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12楼2012-07-06 12:18:13
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-07 13:46:39
我也构建过Bamh I和 NotI 为酶切位点的质粒，taka的酶没有neb的好用，我都试过了，建议你用NEB的酶，过夜可以切开，另外注意质粒的纯度和浓度。
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coasttocoast。
13楼2012-07-06 15:47:25
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

最好用NEB的not i酶，taka的不怎么好用，另外质粒的纯度和浓度要好，
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coasttocoast。
14楼2012-07-06 15:52:00
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

是能切开的，没有问题！我一向都是切两个小时就好了的，切的时候要加BSA的，这个有没有注意？
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15楼2012-07-06 21:54:14
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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-07-07 13:46:55
如果是重组质粒，可能最初扩增就有问题。另外关于酶切效率，个人认为应适当扩大酶切体系（特别是Takara的），单纯增加酶量不太合适。如果条件允许，建议使用NEB的内切酶，就是贵一些，但是速度效率好，检测酶切半小时就好，用于后续试验要回收的一般酶切一个半小时或两小时都足够了。
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16楼2012-07-07 13:15:39
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钟mjzzzzzz

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-06 15:47:25
我也构建过Bamh I和 NotI 为酶切位点的质粒，taka的酶没有neb的好用，我都试过了，建议你用NEB的酶，过夜可以切开，另外注意质粒的纯度和浓度。

您好，请问您这两个酶双切体系是如何？切多久？
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17楼2016-10-30 22:53:29
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sailor521

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by aofeng860308 at 2012-07-06 21:54:14
是能切开的，没有问题！我一向都是切两个小时就好了的，切的时候要加BSA的，这个有没有注意？

01%BSA加多少?

发自小木虫Android客户端
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别太放肆，没什么用！
18楼2017-01-06 20:31:17
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