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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问Not I的酶切效率怎样，过夜酶切都没切开！！
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

[求助] 请问Not I的酶切效率怎样，过夜酶切都没切开！！

我用的是TAKARA的，还特意加大酶量到1ul，质粒只加了2ul，与BamH I 按说明书加缓冲液过夜切都没切开！今天单独单酶切一下，6小时后跑电泳看了一下，BamH I都切干净了，Not I没切开……有人用过这个酶切麽，请问效率如何……我现在在怀疑是不是我扩增出来的目的片段有问题
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
1楼 2012-07-03 21:29:14
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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-07-07 13:46:55
如果是重组质粒，可能最初扩增就有问题。另外关于酶切效率，个人认为应适当扩大酶切体系（特别是Takara的），单纯增加酶量不太合适。如果条件允许，建议使用NEB的内切酶，就是贵一些，但是速度效率好，检测酶切半小时就好，用于后续试验要回收的一般酶切一个半小时或两小时都足够了。
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16楼2012-07-07 13:15:39
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dragon1971

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-04 13:55:38
用过，效率不如BamHI，但也是能切开的，可以扩大一下反应休体系试试看。要是引物设计没有问题的话，扩增出来的目的片段一般没有问题，但也不排除非特异性扩增。
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2楼2012-07-03 21:40:01
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congenial

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
NotI 切超螺旋效率不好。但是能切开。有条件的话限制酶还是买NEB的。
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3楼2012-07-04 05:02:09
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测序看看酶切位点有无突变，另外不要用错buffer
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相信自己
4楼2012-07-04 08:41:00
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