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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

[求助] 请问Not I的酶切效率怎样,过夜酶切都没切开!!

我用的是TAKARA的,还特意加大酶量到1ul,质粒只加了2ul,与BamH I 按说明书加缓冲液过夜切都没切开!今天单独单酶切一下,6小时后跑电泳看了一下,BamH I都切干净了,Not I没切开……有人用过这个酶切麽,请问效率如何……我现在在怀疑是不是我扩增出来的目的片段有问题
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jimjohntall

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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我之前用N0TⅠ切过质粒,过夜可以切的下来的。若没有切开有可能是你的片段不干净有污染。
7楼2012-07-04 12:39:51
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dragon1971

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-04 13:55:38
用过,效率不如BamHI,但也是能切开的,可以扩大一下反应休体系试试看。要是引物设计没有问题的话,扩增出来的目的片段一般没有问题,但也不排除非特异性扩增。
2楼2012-07-03 21:40:01
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congenial

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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NotI 切超螺旋效率不好。但是能切开。有条件的话限制酶还是买NEB的。
3楼2012-07-04 05:02:09
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
测序看看酶切位点有无突变,另外不要用错buffer
相信自己
4楼2012-07-04 08:41:00
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