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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒双酶切
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bluesky6636

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】质粒双酶切 已有11人参与

我用碱裂解法提起了质粒（PBI121），下一步打算做双酶切(BamH1,ScaI)。试问一下，在做双酶切之前，提取出来的质粒需要做纯化吗？
谢谢大家了
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1楼 2010-05-19 15:49:02
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xzx135

铁杆木虫 (正式写手)
★
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不用，算好一个酶切体系，质粒直接加就好了
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2楼2010-05-19 16:18:10
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk:欢迎多多交流~~ 2010-05-19 16:38:53
lstt09nk:友情提示：你可以升级了，点击升级即可~~ 2010-05-19 16:39:18
减法提取的质粒能够满足酶切需要，不必纯化，但须加入无DNA酶的RNA酶，接着，在37度消化30分钟以去除菌的RNA。或者，如果你需要的酶切时间等于或超过30分钟，那么，取一定量的已加入RNA酶的质粒溶液，加入酶切buffer和相应的酶进行酶切即可。
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3楼2010-05-19 16:19:58
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zhenpeng84

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
大家都好刻苦，现在大多的实验室都用现成的盒子，呵呵
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4楼2010-05-27 16:50:55
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一般没有必要，你要是做连接的，那就纯化吧～
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5楼2010-05-27 16:52:04
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chachaxionga

新虫 (正式写手)
★ ★ ★
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scelab(金币+2):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-27 22:02:39
但一般实验室还是有碱裂解来抽提质粒的，但有时候酶切出来效果不怎么好！！
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6楼2010-05-27 21:32:47
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临风7071

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你可以做个180微升的酶切体系，切玩进行回收，可以得到很纯的产物，可直接用于实验
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7楼2010-05-28 00:12:37
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fywjp

木虫 (正式写手)
不用的，很好切的
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8楼2010-05-28 14:37:01
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crab1983

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不用纯化 直接加就行
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9楼2010-05-28 15:00:11
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风荻

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没有质粒抽提试剂盒吗？双眉切前用试剂盒抽提质粒，之后做双眉切绝对没问题的
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10楼2010-06-08 15:16:51
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