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bluesky6636

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】质粒双酶切已有11人参与

我用碱裂解法提起了质粒(PBI121),下一步打算做双酶切(BamH1,ScaI)。试问一下,在做双酶切之前,提取出来的质粒需要做纯化吗?
谢谢大家了
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xzx135

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不用,算好一个酶切体系,质粒直接加就好了
2楼2010-05-19 16:18:10
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk:欢迎多多交流~~ 2010-05-19 16:38:53
lstt09nk:友情提示:你可以升级了,点击升级即可~~ 2010-05-19 16:39:18
减法提取的质粒能够满足酶切需要,不必纯化,但须加入无DNA酶的RNA酶,接着,在37度消化30分钟以去除菌的RNA。或者,如果你需要的酶切时间等于或超过30分钟,那么,取一定量的已加入RNA酶的质粒溶液,加入酶切buffer和相应的酶进行酶切即可。
3楼2010-05-19 16:19:58
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zhenpeng84

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
大家都好刻苦,现在大多的实验室都用现成的盒子,呵呵
4楼2010-05-27 16:50:55
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一般没有必要,你要是做连接的,那就纯化吧~
5楼2010-05-27 16:52:04
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chachaxionga

新虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+2):鼓励新虫!欢迎多来交流!:tiger06: 2010-05-27 22:02:39
但一般实验室还是有碱裂解来抽提质粒的,但有时候酶切出来效果不怎么好!!
6楼2010-05-27 21:32:47
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临风7071

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你可以做个180微升的酶切体系,切玩进行回收,可以得到很纯的产物,可直接用于实验
7楼2010-05-28 00:12:37
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fywjp

木虫 (正式写手)

不用的,很好切的
8楼2010-05-28 14:37:01
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crab1983

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不用纯化 直接加就行
9楼2010-05-28 15:00:11
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风荻

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
没有质粒抽提试剂盒吗?双眉切前用试剂盒抽提质粒,之后做双眉切绝对没问题的
10楼2010-06-08 15:16:51
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