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bluesky6636

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】质粒双酶切 已有11人参与

我用碱裂解法提起了质粒(PBI121),下一步打算做双酶切(BamH1,ScaI)。试问一下,在做双酶切之前,提取出来的质粒需要做纯化吗?
谢谢大家了
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一般没有必要,你要是做连接的,那就纯化吧~
5楼2010-05-27 16:52:04
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xzx135

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不用,算好一个酶切体系,质粒直接加就好了
2楼2010-05-19 16:18:10
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk:欢迎多多交流~~ 2010-05-19 16:38:53
lstt09nk:友情提示:你可以升级了,点击升级即可~~ 2010-05-19 16:39:18
减法提取的质粒能够满足酶切需要,不必纯化,但须加入无DNA酶的RNA酶,接着,在37度消化30分钟以去除菌的RNA。或者,如果你需要的酶切时间等于或超过30分钟,那么,取一定量的已加入RNA酶的质粒溶液,加入酶切buffer和相应的酶进行酶切即可。
3楼2010-05-19 16:19:58
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zhenpeng84

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
大家都好刻苦,现在大多的实验室都用现成的盒子,呵呵
4楼2010-05-27 16:50:55
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