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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】Not I/EcoR I双酶切体系确定
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feiye2214

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】Not I/EcoR I双酶切体系确定 已有4人参与

如题，试剂说明书上说的Not I酶反应体系中要加10×H Buffer 、0.1%BSA 、0.1%TritonX-100 ；EcoR I酶反应体系中只要加10×H Buffer
我想做一个质粒的双酶切，需要分开酶切吗？
能不能同时酶切啊，如果用Not I酶反应体系，会不会影响EcoR I酶的反应效率？
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1楼 2010-08-27 12:59:05
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oyanxuelai

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
应该可以!查看一下takaRa公司的说明书吧!好像里面有写得很清楚!
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2楼2010-08-27 13:24:12
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feiye2214

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by oyanxuelai at 2010-08-27 13:24:12:
应该可以!查看一下takaRa公司的说明书吧!好像里面有写得很清楚!

没看到有双酶切的相关信息，只有对应的单一酶切的体系和反应温度啊
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3楼2010-08-27 14:08:26
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oyanxuelai

银虫 (小有名气)
★ ★
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silicare(金币+1):很热心 2010-08-27 21:13:17
在Double Digest(双酶切反应)时的Universal Buffer(通用缓冲液)使用表中,自己可以找到你想要的双酶共Buffer条件,Not I/EcoR I双酶切体系为1×H+BSA
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4楼2010-08-27 14:59:51
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lfkey

木虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):欢迎新人多多交流 2010-08-27 21:13:47
可以查阅TAKARA公司的双酶切反应的通用缓冲液使用表，Not I与EcoR I双酶切体系使用的缓冲液为1×H+BSA
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年轻没有失败！
5楼2010-08-27 15:48:28
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redmond

新虫 (初入文坛)

问题解决

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以的,只要选择两者共同适合的buffer就可以，如果温度不同就需要，分开做
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6楼2010-08-27 16:32:11
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