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韩丽丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DsRed为什么不发红色荧光?已有4人参与

问题是这样的,我构建了一个载体,基本结构是pCMV-DsRed1-IVS-IRES-Hyg-SV40polyA,其中DsRed1是从pDsRed1-N1这个载体上用BamH1和Not1切下的包括kazaka序列和DsRed1基因的起始密码子和终止密码子的序列,下游的Hyg是潮霉素抗性基因,我本来希望能用IRES(核糖体结合位点)构建能同时表达两个基因的载体,但是转到细胞里发现红的只有聊聊几个,重复了很多次都是如此,我同时转染了pDsRed1-N1做为阳性对照,发红光的细胞很多很多,能达到80%,我不知道自己的问题出在哪里希望各位高人指点,先谢谢大家!
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-07-19 17:34:49
外转基因的表达量首先取决于你的基因本身,可能你的基因本身在细胞内存在着严格的调控,不可能表达太多。其次才是启动子和转染效率。
2楼2010-07-19 10:20:11
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韩丽丽

新虫 (小有名气)

谢谢nicknelson的回复,当发现存在的问题后,我先后转了小鼠C2C12,PH-A,293三种细胞,都得到同样的结果,每次我都同时转染pDsRed1-N1做为阳性对照,三种细胞中红蛋白表达量都很高,应该可以排除细胞对该基因的表达排斥。我想问下会不会红蛋白有什么特性不适合这样的表达结构?
3楼2010-07-19 17:27:48
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nanobio8816

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我是一新手,手头上有DsRed质粒,但不知为什么转染后用我们的显微镜观察不到,是我们的显微镜激发光不满足要求吗?请问楼主用的是什么牌子的显微镜,配的什么光源和滤光片啊
4楼2010-07-20 09:49:58
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gdzhaojiafu

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我想问这个问题楼上解决没有,我也遇到了类似问题!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2016-11-26 02:40:10
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