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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DsRed为什么不发红色荧光？
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韩丽丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DsRed为什么不发红色荧光？ 已有4人参与

问题是这样的，我构建了一个载体，基本结构是pCMV-DsRed1-IVS-IRES-Hyg-SV40polyA,其中DsRed1是从pDsRed1-N1这个载体上用BamH1和Not1切下的包括kazaka序列和DsRed1基因的起始密码子和终止密码子的序列，下游的Hyg是潮霉素抗性基因，我本来希望能用IRES(核糖体结合位点)构建能同时表达两个基因的载体，但是转到细胞里发现红的只有聊聊几个，重复了很多次都是如此，我同时转染了pDsRed1-N1做为阳性对照，发红光的细胞很多很多，能达到80%，我不知道自己的问题出在哪里希望各位高人指点，先谢谢大家！
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1楼 2010-07-19 09:12:22
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-07-19 17:34:49
外转基因的表达量首先取决于你的基因本身，可能你的基因本身在细胞内存在着严格的调控，不可能表达太多。其次才是启动子和转染效率。
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2楼2010-07-19 10:20:11
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韩丽丽

新虫 (小有名气)
谢谢nicknelson的回复，当发现存在的问题后，我先后转了小鼠C2C12，PH-A,293三种细胞，都得到同样的结果，每次我都同时转染pDsRed1-N1做为阳性对照，三种细胞中红蛋白表达量都很高，应该可以排除细胞对该基因的表达排斥。我想问下会不会红蛋白有什么特性不适合这样的表达结构？
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3楼2010-07-19 17:27:48
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nanobio8816

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我是一新手，手头上有DsRed质粒，但不知为什么转染后用我们的显微镜观察不到，是我们的显微镜激发光不满足要求吗？请问楼主用的是什么牌子的显微镜，配的什么光源和滤光片啊
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4楼2010-07-20 09:49:58
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gdzhaojiafu

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我想问这个问题楼上解决没有，我也遇到了类似问题！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2016-11-26 02:40:10
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