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韩丽丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DsRed为什么不发红色荧光?已有4人参与

问题是这样的,我构建了一个载体,基本结构是pCMV-DsRed1-IVS-IRES-Hyg-SV40polyA,其中DsRed1是从pDsRed1-N1这个载体上用BamH1和Not1切下的包括kazaka序列和DsRed1基因的起始密码子和终止密码子的序列,下游的Hyg是潮霉素抗性基因,我本来希望能用IRES(核糖体结合位点)构建能同时表达两个基因的载体,但是转到细胞里发现红的只有聊聊几个,重复了很多次都是如此,我同时转染了pDsRed1-N1做为阳性对照,发红光的细胞很多很多,能达到80%,我不知道自己的问题出在哪里希望各位高人指点,先谢谢大家!
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-07-19 17:34:49
外转基因的表达量首先取决于你的基因本身,可能你的基因本身在细胞内存在着严格的调控,不可能表达太多。其次才是启动子和转染效率。
2楼2010-07-19 10:20:11
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