| 查看: 725 | 回复: 2 | |||
[交流]
【求助/交流】Fosmid文库双酶切切不开！急求 已有2人参与
|
|
我今天做Fosmid克隆的双酶切，用的是EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ的双酶切，载体大小为8100bp，我的目的片段是35Kb，参考的文献上是用这两种酶切的，而且能切开，我的结果没有切开，跑的普通琼脂糖电泳，23Kb的marker都已经跑开了，但是Fosmid没有切开，在点样孔附近有一大团。好奇怪，为什么没切开呢，我的酶量各加了1u，同时怕酶浓度太大，所以又做了酶量为0.5ul的，可是都没有切开。不知道哪里出问题了，有做过Fosmid克隆酶切的吗？急求原因了，我在想是不是有必要跑脉冲场电泳来检测啊？还是换用Not Ⅰ进行酶切呢？ 非常感谢大家，这是我实验的最后一步了，如果这步做完了就基本上毕业了，谢谢大家了  |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有59人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有8人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 测酶缓冲体系的配置
已经有3人回复
- 养一个杆菌，生长很好，但是酶活一直很低，会是神马原因
已经有7人回复
- 蔬菜水果匀浆后，其体内的各种酶会被破坏吗？
已经有11人回复
- 实验室双螺杆挤出机推荐
已经有21人回复
- 怎样测定脂肪酸去饱和酶活性
已经有11人回复
- 琼脂糖 色谱 纤维素酶 分离
已经有3人回复
- 本人做了双酶切连接转化，真的真的有想死的心了
已经有6人回复
- 双酶切
已经有4人回复
- 酶切问题
已经有11人回复
- 【资料】宏基因组Fosmid 文库构建
已经有84人回复
- 双酶切切出了5条条带
已经有9人回复
- 【求助/交流】双酶切切不动
已经有21人回复
brightfuture01
木虫之王 (文坛精英)
我爱打老虎
- MolEPI: 14
- 应助: 24 (小学生)
- 贵宾: 1.2
- 金币: 113300
- 散金: 1526
- 红花: 224
- 沙发: 1
- 帖子: 28949
- 在线: 3692.8小时
- 虫号: 464575
- 注册: 2007-11-21
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+10):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-11-08 23:10:35
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+10):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-11-08 23:10:35
|
我初步分析一下： 你的凝胶浓度应该跑0.8%或者更低的； 如果你的23kb 的 lamda DNA marker都已经分开的话，那么你的质粒不应该集中在 点样孔附近，因为如果那是未酶切开的质粒的话道理上来讲应该跑出孔去的； 你在说你的酶量的时候并未说你的酶切体系大小； 我的一点怀疑及一点建议： 我怀疑你的粘粒DNA没有提取好，里面含杂质较多，要么是蛋白质，要么是基因组DNA； 我的建议是，你双酶切切不开，你做单酶切了么？比如你用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ的单酶切作为双酶切的对照，如果两个单酶切都能切开，这能说明什么？如果两个单酶切都切不开或者只有一个能切开，这又说明什么? 呵呵，实验做不出来的时候，再次重复的时候一定要做对照，否则盲目重复没有任何意义。 祝好运 |
2楼2010-11-08 22:47:07
3楼2010-11-09 08:21:56
