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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 微生物、发酵 » 怎样测定脂肪酸去饱和酶活性
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574759350

铁虫 (小有名气)

[求助] 怎样测定脂肪酸去饱和酶活性

脂肪酸去饱和酶在内质网膜上，难分离。请问先要怎么分离纯化？如何测定脂肪酸去饱和酶的活性？
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1楼2012-03-27 15:56:44
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cxhjm

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
574759350: 金币+2, ★有帮助 2012-04-05 19:17:06
不能提出来测吗？
总有间接测定的方法的吧？我也对这个问题很关注，希望有人提出可行的想法
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574759350
2楼2012-04-03 10:41:49
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小糊涂虫虫

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
574759350: 金币+1 2012-04-05 19:16:41
感觉先用蛋白酶酶解出去外壳，适量添加酶
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ChanceonlyFavorsthePreparedMind~~~PennyWise,PoundFoolish~
3楼2012-04-04 10:30:44
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yanjiacheng

木虫 (正式写手)
是添加其底物，然后洗去培养液，测产物的量吗？
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持黄金为珍贵，知安乐方值千金。
4楼2012-04-04 14:03:49
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574759350

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by cxhjm at 2012-04-03 10:41:49:
不能提出来测吗？
总有间接测定的方法的吧？我也对这个问题很关注，希望有人提出可行的想法

请问你有没有相关的文献，我这有几篇文献但是我也没看明白是怎么做的，好像是有同位素标记
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5楼2012-04-05 19:11:59
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309789268

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
574759350: 金币+2, ★有帮助 2012-04-10 10:15:28
红四氮唑即氯化三苯基四氮唑（TTC）是一种氧化剂，从脱氢酶接受电子后自身从无色被还原为红色的三苯基甲赞（triphenyformazan，简称TF），从而可以表征细胞内脱饱和酶的活性，这只是一个大概的方法，测的也是细胞内总的不合酶的活性，只能做为一个参考。
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6楼2012-04-09 22:31:26
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574759350

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 309789268 at 2012-04-09 22:31:26:
红四氮唑即氯化三苯基四氮唑（TTC）是一种氧化剂，从脱氢酶接受电子后自身从无色被还原为红色的三苯基甲赞（triphenyformazan，简称TF），从而可以表征细胞内脱饱和酶的活性，这只是一个大概的方法，测的也是细胞 ...

我要测的是催化单不饱和脂肪酸合成的Δ9-脂肪酸去饱和酶，利用这种方法可以么？
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7楼2012-04-10 10:15:11
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309789268

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
hsd3521: 金币+1, 应助指数+1, 感谢应助，帮助其他虫友 2012-04-11 08:20:49
574759350: 金币+2, ★有帮助 2012-04-11 09:18:00
引用回帖:
7楼: Originally posted by 574759350 at 2012-04-10 10:15:11:
我要测的是催化单不饱和脂肪酸合成的Δ9-脂肪酸去饱和酶，利用这种方法可以么？

不行，胞内脱不饱和酶有Δ9-，Δ4-，Δ5-，Δ6-，Δ12-，很多，现在好像还没有测单一饱和酶的方法。你测的是什么体系中的？硬脂酸到油酸的过程？1999-SCUT-被孢霉Δ～9脂肪酸脱饱和酶cDNA序列的克隆与鉴定，一篇博士论文，里面也没有提到测酶法的方法。
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8楼2012-04-10 19:03:32
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574759350

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 309789268 at 2012-04-10 19:03:32:
不行，胞内脱不饱和酶有Δ9-，Δ4-，Δ5-，Δ6-，Δ12-，很多，现在好像还没有测单一饱和酶的方法。你测的是什么体系中的？硬脂酸到油酸的过程？1999-SCUT-被孢霉Δ～9脂肪酸脱饱和酶cDNA序列的克隆与鉴定，一篇 ...

恩，是的，我是测软脂酸和硬脂酸转化为单不饱和脂肪酸过程的酶活，谢谢！
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9楼2012-04-11 09:17:50
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309789268

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
574759350: 金币+2, ★有帮助 2012-04-12 08:59:40
引用回帖:
9楼: Originally posted by 574759350 at 2012-04-11 09:17:50:
恩，是的，我是测软脂酸和硬脂酸转化为单不饱和脂肪酸过程的酶活，谢谢！

你是构建的工程菌吗？如果是构建的工程菌就只有单一脱不饱和酶，这个方法可能还是可以用！
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10楼2012-04-11 13:48:40
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