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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】拟改造一个表达载体，请大家帮忙分析下如何进行
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gsf313

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】拟改造一个表达载体，请大家帮忙分析下如何进行 已有2人参与

情况是这样的：

    我要构建一个载体，然后用农杆菌侵染的方式转化载体到木薯中。

    现在的问题是：1.我们所木薯的遗传转化体系只有潮霉素抗性筛选取得突破

                  2.我的设计中，表达载体是用壮观霉素的

    哎，当初什么都不懂，又没有人带，全是自己瞎折腾，完全借鉴一个外国文献来做，载体差不多就要构建好了，可是，转化体系还没建立起来，开始懵了……

       现有两个方案：1、把我原本要用的那个载体中，插入一段潮霉素抗性基因
                  2、在pCAMBIA系列，某个具有潮霉素抗性基因的载体上，在其MCS区域中，插入一个not I基因

    高人帮我分析下，哪种是易操作、可行的？

    多谢多谢了！

    祈祷很多高人能看到这个帖子！！！！！！
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1楼 2010-08-05 16:26:47
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
gsf313(金币+1):谢谢参与
gsf313(金币+1):谢谢，能具体说明下吗？ 2010-08-06 01:41:09
方案2：合成一段含not i 的mcs，退火，链接到旧的MCS中
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2楼2010-08-05 18:16:45
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gsf313

铁虫 (小有名气)
谢谢楼上的筒子回复，能不能具体说明下操作？有点看不太明白……
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3楼2010-08-06 08:42:14
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silicare

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优秀版主
呵呵，本筒子简单说一下哈

就是人工合成两个MCS单链片段，退火，得到两端带有酶切位点的双链片段（比如一端是bamh i，一端是ecor i，中间的MCS中就含有你的not I）

用bamh i 和ecor i双酶切你的载体，得到载体骨架

用这两个连接，就可以替换掉你原来载体中的MCS了
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4楼2010-08-06 10:21:29
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