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gsf313

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】拟改造一个表达载体,请大家帮忙分析下如何进行 已有2人参与

情况是这样的:

    我要构建一个载体,然后用农杆菌侵染的方式转化载体到木薯中。

    现在的问题是:1.我们所木薯的遗传转化体系只有潮霉素抗性筛选取得突破

                  2.我的设计中,表达载体是用壮观霉素的

    哎,当初什么都不懂,又没有人带,全是自己瞎折腾,完全借鉴一个外国文献来做,载体差不多就要构建好了,可是,转化体系还没建立起来,开始懵了……

       现有两个方案:1、把我原本要用的那个载体中,插入一段潮霉素抗性基因
                  2、在pCAMBIA系列,某个具有潮霉素抗性基因的载体上,在其MCS区域中,插入一个not I基因

    高人帮我分析下,哪种是易操作、可行的?

    多谢多谢了!

    祈祷很多高人能看到这个帖子!!!!!!
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silicare

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★
gsf313(金币+1):谢谢参与
gsf313(金币+1):谢谢,能具体说明下吗? 2010-08-06 01:41:09
方案2:合成一段含not i 的mcs,退火,链接到旧的MCS中
2楼2010-08-05 18:16:45
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gsf313

铁虫 (小有名气)

谢谢楼上的筒子回复,能不能具体说明下操作?有点看不太明白……
3楼2010-08-06 08:42:14
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silicare

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呵呵,本筒子简单说一下哈

就是人工合成两个MCS单链片段,退火,得到两端带有酶切位点的双链片段(比如一端是bamh i,一端是ecor i,中间的MCS中就含有你的not I)

用bamh i 和ecor i双酶切你的载体,得到载体骨架

用这两个连接,就可以替换掉你原来载体中的MCS了
4楼2010-08-06 10:21:29
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