| 查看: 1881 | 回复: 11 | |||
[交流]
【求助/交流】关于建立cDNA文库的诸多问题，拜请解答
|
|||
|
1、clontech的smarter kit大家有米有用过？效果怎样？ invitrogen的有用过的米？多少钱买的？效果捏? 2、质粒文库跟酵母文库差别大吗？我想筛est，然后做表达。 3、clontech的技术客服说起始不用mRNA也可以，用总RNA就行，还声称10ng总RNA就可以。大家觉得靠谱吗？ 4、关于mRNA质量的验证，说是有smear，smear是什么样子的？能否提供图片，实在不行文字说明，举例子，打比方都行。 5、载体选择上有没有什么讲究？ To check quality, analyze 100 ng of your mRNA using a Bioanalyzer, or by performing agarose gel electrophoresis using a 1% E-Gel® EX Gel (see page 45 for ordering information). Your mRNA will appear as a smear, with the greatest intensity in the range of 1 to 3 kb. Some rRNA bands may still be faintly visible. If you do not detect a smear, or if the majority of the smear is significantly lessthan 1 kb, you will need to repeat the RNA isolation. Be sure to follow the recommendations listed on the previous page to prevent RNase contamination. 这里关于mRNA电泳的描述，我能否认为smear是弥散的条带。。。。 谢谢各位啦！！ 鞠躬！！ [ Last edited by sai00fuji on 2011-2-26 at 20:42 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有282人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于超级计算机的安装权限问题：不能用sudo命令，该如何是好？
已经有18人回复
- ----关于CSC群里提到的评审以电子材料为主，纸质材料备案的问题-------
已经有24人回复
- 关于托福报班的一个问题
已经有6人回复
- 关于reject and resubmit 的问题
已经有14人回复
- 16S rDNA文库与cDNA文库的选择
已经有5人回复
- 请问cDNA-AFLP中酶切的问题，谢谢大家
已经有7人回复
- 用clontech的SMART建cDNA文库，连接转化不成功，求助！！急死了！！！
已经有3人回复
- 【求助/交流】求助高手-棉花中RNA提取质量验证及反转后cDNA质量验证问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】谁用SMART的cDNA文库构建试剂盒？？？
已经有6人回复
- 【求助/交流】从RNA到cDNA合成再到克隆PCR的实验技巧和操作细节问题若干，寻求解答
已经有12人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
双一流南京医科大学招计算机、AI、统计、生物信息等方向26年9月入学博士
+1/192
-
接样SEM/XPS/XRD/FTIR/BET等多种测试/提供预存服务
+1/86
-
天津大学化学系吴立朋课题组申请考核制博士招生/博后招聘
+1/80
-
坐标北京不异地
+1/78
-
【招生啦招生啦】武汉理工大学朱曼副研究员招收2026年9月入学博士/硕士研究生
+1/47
-
上海大学 力工学院 锂电池方向 博士研究生招生
+1/39
-
有没有在ITO或者FTO玻璃上做好的CdS薄膜购买？
+1/31
-
中南民族大学超支化聚合物团队2026年博士研究生招生
+1/30
-
中科院深圳先进院成会明院士\唐永炳国家杰青团队招聘
+2/30
-
中科大环境系张常勇教授课题组招聘副研/博士后（一人一议）
+1/21
-
天津大学化学系吴立朋课题组申请考核制博士招生/博后招聘-有机化学，金属有机
+1/19
-
海南大学！海洋与极地地质团队长期招收博士和博士后
+1/17
-
经济学博士（金融方向）招生，211重点大学，2026年9月入学，申请-考核制。
+1/14
-
澳门科技大学药学院诚招2026年秋季药剂学/生物材料方向博士研究生
+1/10
-
山东大学集成电路学院博士招生1名
+1/3
-
如何确定博后期间的研究方向？
+1/2
-
河南师范大学植物生殖生物学科研团队博士招聘
+1/2
-
武汉理工大学胡老师课题组招收2026年博士研究生
+1/2
-
有没有做核磁共振系统的虫友呢
+1/1
-
下一代半导体激光器概念验证中心（筹）招聘工程师
+1/1
brightfuture01
木虫之王 (文坛精英)
- MolEPI: 14
- 应助: 24 (小学生)
- 贵宾: 1.2
- 金币: 113860
- 帖子: 28925
- 在线: 3665.8小时
- 虫号: 464575
2楼2011-02-25 21:31:38
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 鼓励参与交流 2011-02-26 09:05:29
sai00fuji(金币+12): 2011-02-26 17:15:37
lstt09nk(金币+3): 鼓励参与交流 2011-02-26 09:05:29
sai00fuji(金币+12): 2011-02-26 17:15:37
|
1.用过clontech的不错，invitrogen的没有用过，不敢评价，不过invitrogen也是大牌子，具体选择什么试剂盒还是楼主你比较一下两个试剂盒的说明书最好 2.通常的文库都是测序用的，除非特殊的试剂盒，例如酵母双杂交文库试剂盒。我看你的目的应该就是构建一个普通的cDNA文库，然后测序，然后选择目的的基因酵母表达吧。 3.clontech的SMART就是直接用的总RNA，你看一下说明书就知道了，不用纯化mRNA的 4.smear说的是双链cDNA，类似于沙发发的图，好的双链图谱是smear+几条特征带，因样品不同而异 5.不知道你说的什么载体，是构建文库的载体吗，每一种试剂盒都有固定的载体。一般选择质粒的载体吧 |
4楼2011-02-25 22:51:39
brightfuture01
木虫之王 (文坛精英)
- MolEPI: 14
- 应助: 24 (小学生)
- 贵宾: 1.2
- 金币: 113860
- 帖子: 28925
- 在线: 3665.8小时
- 虫号: 464575
5楼2011-02-26 10:50:34
3楼2011-02-25 22:05:44
|
再具体问一下，clontech的kit，起始需要总RNA大约多少？全长率能达到多少？ To check quality, analyze 100 ng of your mRNA using a Bioanalyzer, or by performing agarose gel electrophoresis using a 1% E-Gel® EX Gel (see page 45 for ordering information). Your mRNA will appear as a smear, with the greatest intensity in the range of 1 to 3 kb. Some rRNA bands may still be faintly visible. If you do not detect a smear, or if the majority of the smear is significantly lessthan 1 kb, you will need to repeat the RNA isolation. Be sure to follow the recommendations listed on the previous page to prevent RNase contamination. 这里关于mRNA电泳的描述，我能否认为smear是弥散的条带。。。。 谢谢~ |
6楼2011-02-26 17:33:53
7楼2011-02-26 19:49:38
8楼2011-02-26 20:44:35
9楼2011-02-26 20:48:44
10楼2011-12-21 11:38:34
11楼2013-07-10 20:26:48
12楼2013-07-10 20:28:05