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[交流]
【求助/交流】关于建立cDNA文库的诸多问题，拜请解答
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1、clontech的smarter kit大家有米有用过？效果怎样？ invitrogen的有用过的米？多少钱买的？效果捏? 2、质粒文库跟酵母文库差别大吗？我想筛est，然后做表达。 3、clontech的技术客服说起始不用mRNA也可以，用总RNA就行，还声称10ng总RNA就可以。大家觉得靠谱吗？ 4、关于mRNA质量的验证，说是有smear，smear是什么样子的？能否提供图片，实在不行文字说明，举例子，打比方都行。 5、载体选择上有没有什么讲究？ To check quality, analyze 100 ng of your mRNA using a Bioanalyzer, or by performing agarose gel electrophoresis using a 1% E-Gel® EX Gel (see page 45 for ordering information). Your mRNA will appear as a smear, with the greatest intensity in the range of 1 to 3 kb. Some rRNA bands may still be faintly visible. If you do not detect a smear, or if the majority of the smear is significantly lessthan 1 kb, you will need to repeat the RNA isolation. Be sure to follow the recommendations listed on the previous page to prevent RNase contamination. 这里关于mRNA电泳的描述，我能否认为smear是弥散的条带。。。。 谢谢各位啦！！ 鞠躬！！ [ Last edited by sai00fuji on 2011-2-26 at 20:42 ] |
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brightfuture01
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2楼2011-02-25 21:31:38
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sai00fuji(金币+12): 2011-02-26 17:15:37
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1.用过clontech的不错，invitrogen的没有用过，不敢评价，不过invitrogen也是大牌子，具体选择什么试剂盒还是楼主你比较一下两个试剂盒的说明书最好 2.通常的文库都是测序用的，除非特殊的试剂盒，例如酵母双杂交文库试剂盒。我看你的目的应该就是构建一个普通的cDNA文库，然后测序，然后选择目的的基因酵母表达吧。 3.clontech的SMART就是直接用的总RNA，你看一下说明书就知道了，不用纯化mRNA的 4.smear说的是双链cDNA，类似于沙发发的图，好的双链图谱是smear+几条特征带，因样品不同而异 5.不知道你说的什么载体，是构建文库的载体吗，每一种试剂盒都有固定的载体。一般选择质粒的载体吧 |
4楼2011-02-25 22:51:39
brightfuture01
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再具体问一下，clontech的kit，起始需要总RNA大约多少？全长率能达到多少？ To check quality, analyze 100 ng of your mRNA using a Bioanalyzer, or by performing agarose gel electrophoresis using a 1% E-Gel® EX Gel (see page 45 for ordering information). Your mRNA will appear as a smear, with the greatest intensity in the range of 1 to 3 kb. Some rRNA bands may still be faintly visible. If you do not detect a smear, or if the majority of the smear is significantly lessthan 1 kb, you will need to repeat the RNA isolation. Be sure to follow the recommendations listed on the previous page to prevent RNase contamination. 这里关于mRNA电泳的描述，我能否认为smear是弥散的条带。。。。 谢谢~ |
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