应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶切时间确定？
81/1返回列表
查看: 1528  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

feiye2214

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酶切时间确定？ 已有4人参与

我想切片段的两端，一端是EcoR I一端是BamH I，反应时间是一样的，反应温度一个是37，一个是30，缓冲液一个是10×K，一个是10×H，但是两种在10×K下都有很高的效率，
我能不能把两种酶都放进去酶切，用的是10×K缓冲液，时间设定是30度一小时，37度一小时，共两个小时，然后再加10×loading buffer终止
这样可行？？还是要一个酶切之后，再酶切另一端？？
大侠帮忙
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-08-10 18:55:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-11 07:47:39
可以~反正酶活性都是有的
不过不知道EcoR I切两个钟会不会有星活性
但要是质粒量够多也不怕
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-08-10 19:07:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiye2214

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-08-10 19:07:31:
可以~反正酶活性都是有的
不过不知道EcoR I切两个钟会不会有星活性
但要是质粒量够多也不怕

星活性啥意思，不懂请赐教
赞一下 回复此楼
3楼2010-08-10 19:22:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):good！ 2010-08-10 21:02:10
引用回帖:
Originally posted by feiye2214 at 2010-08-10 19:22:01:

星活性啥意思，不懂请赐教

就是酶不去切它该切的地方，瞎切一气
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-08-10 19:23:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
哪个公司的酶？Fermentas？
可以上他们公司的主页，选择两个酶后submit后可以找到他们公司推荐的酶切体系。
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
5楼2010-08-10 20:28:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-11 07:48:07
引用回帖:
Originally posted by feiye2214 at 2010-08-10 19:22:01:

星活性啥意思，不懂请赐教

在某些情况下（比如甘油浓度高，盐离子浓度不合适等等），内切酶的识别位点会发生松弛或变化，导致切割的特异性下降。

EcoRI切的时间过长比较容易产生星号活性，但是两个小时应该没什么大问题，尤其是前一个小时只是30度
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2010-08-10 21:56:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiye2214

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-08-10 20:28:10:
哪个公司的酶？Fermentas？
可以上他们公司的主页，选择两个酶后submit后可以找到他们公司推荐的酶切体系。

大连TAKARA的
回复此楼
7楼2010-08-10 22:39:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-11 07:48:20
引用回帖:
Originally posted by feiye2214 at 2010-08-10 22:39:38:

大连TAKARA的

那没问题
我也做过TaKaRa的EcoRI和BamHI双酶切，用BufferK，30度2h+37度2h都做过，没问题
你样品里的DNA浓度要是不太高，时间可以短一点，1h就好，EcoRI还是尽量避免长时间切，尤其在bufferK里面
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2010-08-10 23:17:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 feiye2214 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭