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汕头大学海洋科学接受调剂
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feiye2214

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酶切时间确定? 已有4人参与

我想切片段的两端,一端是EcoR I一端是BamH I,反应时间是一样的,反应温度一个是37,一个是30,缓冲液一个是10×K,一个是10×H,但是两种在10×K下都有很高的效率,
我能不能把两种酶都放进去酶切,用的是10×K缓冲液,时间设定是30度一小时,37度一小时,共两个小时,然后再加10×loading buffer终止
这样可行??还是要一个酶切之后,再酶切另一端??
大侠帮忙
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-11 07:48:20
引用回帖:
Originally posted by feiye2214 at 2010-08-10 22:39:38:

大连TAKARA的

那没问题
我也做过TaKaRa的EcoRI和BamHI双酶切,用BufferK,30度2h+37度2h都做过,没问题
你样品里的DNA浓度要是不太高,时间可以短一点,1h就好,EcoRI还是尽量避免长时间切,尤其在bufferK里面
8楼2010-08-10 23:17:37
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-11 07:47:39
可以~反正酶活性都是有的
不过不知道EcoR I切两个钟会不会有星活性
但要是质粒量够多也不怕
2楼2010-08-10 19:07:31
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feiye2214

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-08-10 19:07:31:
可以~反正酶活性都是有的
不过不知道EcoR I切两个钟会不会有星活性
但要是质粒量够多也不怕

星活性啥意思,不懂请赐教
3楼2010-08-10 19:22:01
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2):good! 2010-08-10 21:02:10
引用回帖:
Originally posted by feiye2214 at 2010-08-10 19:22:01:

星活性啥意思,不懂请赐教

就是酶不去切它该切的地方,瞎切一气
4楼2010-08-10 19:23:13
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