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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶切时间确定？
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feiye2214

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酶切时间确定？ 已有4人参与

我想切片段的两端，一端是EcoR I一端是BamH I，反应时间是一样的，反应温度一个是37，一个是30，缓冲液一个是10×K，一个是10×H，但是两种在10×K下都有很高的效率，
我能不能把两种酶都放进去酶切，用的是10×K缓冲液，时间设定是30度一小时，37度一小时，共两个小时，然后再加10×loading buffer终止
这样可行？？还是要一个酶切之后，再酶切另一端？？
大侠帮忙
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1楼 2010-08-10 18:55:51
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feiye2214

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-08-10 20:28:10:
哪个公司的酶？Fermentas？
可以上他们公司的主页，选择两个酶后submit后可以找到他们公司推荐的酶切体系。

大连TAKARA的
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7楼2010-08-10 22:39:38
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-11 07:47:39
可以~反正酶活性都是有的
不过不知道EcoR I切两个钟会不会有星活性
但要是质粒量够多也不怕
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-08-10 19:07:31
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feiye2214

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-08-10 19:07:31:
可以~反正酶活性都是有的
不过不知道EcoR I切两个钟会不会有星活性
但要是质粒量够多也不怕

星活性啥意思，不懂请赐教
赞一下 回复此楼
3楼2010-08-10 19:22:01
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):good！ 2010-08-10 21:02:10
引用回帖:
Originally posted by feiye2214 at 2010-08-10 19:22:01:

星活性啥意思，不懂请赐教

就是酶不去切它该切的地方，瞎切一气
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-08-10 19:23:13
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