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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Not I/BamH I双酶切体系缓冲液的选择问题
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cjf-88

银虫 (初入文坛)

[求助] Not I/BamH I双酶切体系缓冲液的选择问题

如题，查了Takara中Double Digestion(双酶切反应)时Universal Buffer(通用缓冲液)的使用表，Not I/BamH I双酶切体系通用缓冲液为：0.5×K+BSA，Not I 酶一般反应体系中的0.1% TritonX-100还用不用加？ 假如在20μl反应体系中，有10×K Buffer，0.1% BSA ，0.1% TritonX-100，各试剂应加多少量？
  麻烦大家了！
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1楼 2013-04-20 19:17:51
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cjf-88

银虫 (初入文坛)
求帮助啊！谢谢大家了！
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2楼2013-04-21 16:04:27
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senix

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-22 08:49:34
cjf-88: 金币+5, ★有帮助, 谢谢 2013-04-28 23:25:39
不用加，直接用Universal Buffer(通用缓冲液)，不用加0.1% TritonX-100！
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做实验就是和上帝玩游戏！
3楼2013-04-21 21:21:45
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cjf-88

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by senix at 2013-04-21 21:21:45
不用加，直接用Universal Buffer(通用缓冲液)，不用加0.1% TritonX-100！

谢谢！请问20μl反应体系中10×K Buffer是加1μl吧？那0.1% BSA 是加2μl还是1μl?
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4楼2013-04-21 22:28:25
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senix

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cjf-88 at 2013-04-21 22:28:25
谢谢！请问20μl反应体系中10×K Buffer是加1μl吧？那0.1% BSA 是加2μl还是1μl?...

20ul体系中，10x buffer加2ul， 0.1%的BSA加0.5ul
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做实验就是和上帝玩游戏！
5楼2013-04-22 08:38:53
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cjf-88

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by senix at 2013-04-22 08:38:53
20ul体系中，10x buffer加2ul， 0.1%的BSA加0.5ul...

BSA加的量不是很理解，下面第一个图是Not I 说明书中的一般反应体系，第二个图是Double Digestion(双酶切反应)时Universal Buffer(通用缓冲液)的使用表中的一段说明：


这个体系内10x buffer加2ul是将buffer稀释了10倍吧？Not I/BamH I双酶切体系通用缓冲液为：0.5×K+BSA，那么终浓度为0.5×时稀释至20倍不是加1μl吗？BSA加的量我就不知道用不用也一样稀释至20倍？不知道我理解的对不对？
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6楼2013-04-22 17:58:35
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curiousdog

银虫 (小有名气)
不适用NEB的吗？NEB有Buffer啊
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理可顿悟，事须渐修。
7楼2013-04-22 17:59:08
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cjf-88

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by curiousdog at 2013-04-22 17:59:08
不适用NEB的吗？NEB有Buffer啊

NEB公司？我们用的是TaKaRa的，购买的酶都有附带buffer的吧?
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8楼2013-04-22 18:05:25
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curiousdog

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cjf-88 at 2013-04-22 18:05:25
NEB公司？我们用的是TaKaRa的，购买的酶都有附带buffer的吧?...

带Buffer啊。我们用NEB的。大多数用buffer 4就行，可以去查双酶切buffer表
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理可顿悟，事须渐修。
9楼2013-04-22 19:05:14
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gyesang

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
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8楼: Originally posted by cjf-88 at 2013-04-22 18:05:25
NEB公司？我们用的是TaKaRa的，购买的酶都有附带buffer的吧?...

本人用过Takara，toyobo, fermentas,NEB四个公司的限制酶，而且本实验室也常备这些酶，个人经验，这四个公司的酶可以统一用NEB的buffer，比如Takara的酶1，fermentas的酶2 用NEB的相应buffer来做酶切，效果没有任何影响
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
10楼2013-04-22 19:36:29
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