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汕头大学海洋科学接受调剂
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cjf-88

银虫 (初入文坛)

[求助] Not I/BamH I双酶切体系缓冲液的选择问题

如题,查了Takara中Double Digestion(双酶切反应)时Universal Buffer(通用缓冲液)的使用表,Not I/BamH I双酶切体系通用缓冲液为:0.5×K+BSA,Not I 酶一般反应体系中的0.1% TritonX-100还用不用加? 假如在20μl反应体系中,有10×K Buffer,0.1% BSA ,0.1% TritonX-100,各试剂应加多少量?
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cjf-88

银虫 (初入文坛)

求帮助啊!谢谢大家了!
2楼2013-04-21 16:04:27
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senix

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流,期待你的精彩1 2013-04-22 08:49:34
cjf-88: 金币+5, 有帮助, 谢谢 2013-04-28 23:25:39
不用加,直接用Universal Buffer(通用缓冲液),不用加0.1% TritonX-100!
做实验就是和上帝玩游戏!
3楼2013-04-21 21:21:45
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cjf-88

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by senix at 2013-04-21 21:21:45
不用加,直接用Universal Buffer(通用缓冲液),不用加0.1% TritonX-100!

谢谢!请问20μl反应体系中10×K Buffer是加1μl吧?那0.1% BSA 是加2μl还是1μl?
4楼2013-04-21 22:28:25
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senix

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cjf-88 at 2013-04-21 22:28:25
谢谢!请问20μl反应体系中10×K Buffer是加1μl吧?那0.1% BSA 是加2μl还是1μl?...

20ul体系中,10x buffer加2ul, 0.1%的BSA加0.5ul
做实验就是和上帝玩游戏!
5楼2013-04-22 08:38:53
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cjf-88

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by senix at 2013-04-22 08:38:53
20ul体系中,10x buffer加2ul, 0.1%的BSA加0.5ul...

BSA加的量不是很理解,下面第一个图是Not I 说明书中的一般反应体系,第二个图是Double Digestion(双酶切反应)时Universal Buffer(通用缓冲液)的使用表中的一段说明:


这个体系内10x buffer加2ul是将buffer稀释了10倍吧?Not I/BamH I双酶切体系通用缓冲液为:0.5×K+BSA,那么终浓度为0.5×时稀释至20倍不是加1μl吗?BSA加的量我就不知道用不用也一样稀释至20倍?不知道我理解的对不对?
6楼2013-04-22 17:58:35
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curiousdog

银虫 (小有名气)

不适用NEB的吗?NEB有Buffer啊
理可顿悟,事须渐修。
7楼2013-04-22 17:59:08
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cjf-88

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by curiousdog at 2013-04-22 17:59:08
不适用NEB的吗?NEB有Buffer啊

NEB公司?我们用的是TaKaRa的,购买的酶都有附带buffer的吧?
8楼2013-04-22 18:05:25
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curiousdog

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by cjf-88 at 2013-04-22 18:05:25
NEB公司?我们用的是TaKaRa的,购买的酶都有附带buffer的吧?...

带Buffer啊。我们用NEB的。大多数用buffer 4就行,可以去查双酶切buffer表
理可顿悟,事须渐修。
9楼2013-04-22 19:05:14
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gyesang

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
8楼: Originally posted by cjf-88 at 2013-04-22 18:05:25
NEB公司?我们用的是TaKaRa的,购买的酶都有附带buffer的吧?...

本人用过Takara,toyobo, fermentas,NEB四个公司的限制酶,而且本实验室也常备这些酶,个人经验,这四个公司的酶可以统一用NEB的buffer,比如Takara的酶1,fermentas的酶2 用NEB的相应buffer来做酶切,效果没有任何影响
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
10楼2013-04-22 19:36:29
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