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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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gbtgwm

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒提取后出现两条亮度相同的带,谁帮我看一下。。。。。。。

本人最近在做稳定表达单克隆,但总是有一部分细胞既没有荧光也不会被杀死,百思不得其解,所以跑了一下提取的质粒,最后跑出两条亮度相同的条带,不知道是所说的质粒的不同状态还是什么的,大家帮我分析一下。
质粒我用的是pEGFP-c1,目的片段900bp,试剂盒用的Qiagen小提。

试剂盒提的重组质粒
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eykong2005

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-18 13:36:30
这很正常,质粒没有酶切前有几种状态,有些是coil,还有是super coil的,所以一般会看到2条带。有个办法可以帮你解惑,选个单酶切位点,再跑胶,就会是一条带了,因为都是线性状态。
2楼2012-06-17 18:01:02
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dajiong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼上说的好哇。质粒也是有螺旋状态的。
哦也
3楼2012-06-17 23:55:42
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timyang14

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-20 15:33:13
2楼说的对,要是质粒提取没有问题的话,有可能出两个条带,一个应该是一条链有缺口的开环DNA,另一个为超螺旋,但是这两个在凝胶上的结果都应该小于DNA长度的理论值,单酶切之后的结果应该是和理论大小一致,
Fighttilldeath
4楼2012-06-20 14:41:25
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jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by timyang14 at 2012-06-20 14:41:25
2楼说的对,要是质粒提取没有问题的话,有可能出两个条带,一个应该是一条链有缺口的开环DNA,另一个为超螺旋,但是这两个在凝胶上的结果都应该小于DNA长度的理论值,单酶切之后的结果应该是和理论大小一致,

有缺口的跑的比线性的要慢
5楼2012-06-20 20:42:29
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wodi5230

铁虫 (初入文坛)

哈哈,受教了
6楼2012-06-22 20:20:58
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gbtgwm

新虫 (初入文坛)

结果是菌种4°C放太久了,质粒变异或降解了,两条最亮的带都没有目的片段,继续跑两条带之后还能跑出一条弥散的带,带有目的。我已经重新用保藏菌种提了质粒,只有一条带了。
7楼2012-07-01 11:00:58
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