应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取后出现两条亮度相同的带，谁帮我看一下。。。。。。。
71/1返回列表
查看: 2100  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

gbtgwm

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒提取后出现两条亮度相同的带，谁帮我看一下。。。。。。。

本人最近在做稳定表达单克隆，但总是有一部分细胞既没有荧光也不会被杀死，百思不得其解，所以跑了一下提取的质粒，最后跑出两条亮度相同的条带，不知道是所说的质粒的不同状态还是什么的，大家帮我分析一下。
质粒我用的是pEGFP-c1，目的片段900bp，试剂盒用的Qiagen小提。

试剂盒提的重组质粒
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-06-17 15:46:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eykong2005

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-18 13:36:30
这很正常，质粒没有酶切前有几种状态，有些是coil，还有是super coil的，所以一般会看到2条带。有个办法可以帮你解惑，选个单酶切位点，再跑胶，就会是一条带了，因为都是线性状态。
赞一下 回复此楼
2楼2012-06-17 18:01:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dajiong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼上说的好哇。质粒也是有螺旋状态的。
赞一下 回复此楼
哦也
3楼2012-06-17 23:55:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

timyang14

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-20 15:33:13
2楼说的对，要是质粒提取没有问题的话，有可能出两个条带，一个应该是一条链有缺口的开环DNA，另一个为超螺旋，但是这两个在凝胶上的结果都应该小于DNA长度的理论值，单酶切之后的结果应该是和理论大小一致，
赞一下 回复此楼
Fighttilldeath
4楼2012-06-20 14:41:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by timyang14 at 2012-06-20 14:41:25
2楼说的对，要是质粒提取没有问题的话，有可能出两个条带，一个应该是一条链有缺口的开环DNA，另一个为超螺旋，但是这两个在凝胶上的结果都应该小于DNA长度的理论值，单酶切之后的结果应该是和理论大小一致，

有缺口的跑的比线性的要慢
赞一下 回复此楼
5楼2012-06-20 20:42:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wodi5230

铁虫 (初入文坛)
哈哈，受教了
回复此楼
6楼2012-06-22 20:20:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gbtgwm

新虫 (初入文坛)
结果是菌种4°C放太久了，质粒变异或降解了，两条最亮的带都没有目的片段，继续跑两条带之后还能跑出一条弥散的带，带有目的。我已经重新用保藏菌种提了质粒，只有一条带了。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2012-07-01 11:00:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gbtgwm 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-09 4/200 2026-03-16 01:21 by Xttdmn
[文学芳草园] 伙伴们，祝我生日快乐吧 +15 myrtle 2026-03-10 24/1200 2026-03-15 21:16 by 苏州_逗号
[考研] 化学工程321分求调剂 +5 大米饭！ 2026-03-15 5/250 2026-03-15 18:49 by a不易
[考研] 289求调剂 +5 步川酷紫123 2026-03-11 5/250 2026-03-15 00:45 by kruisytel
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 求调剂 +3 清风问长安 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:15 by JourneyLucky
[考研] 一志愿浙江大学0856材料与化工求调剂 +4 yansheng@211 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:10 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +5 简木ChuFront 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:29 by JourneyLucky
[考研] 招收0805（材料）调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 0703，333分求调剂 一志愿郑州大学-物理化学 +3 李魔女斗篷 2026-03-11 3/150 2026-03-13 22:24 by JourneyLucky
[考研] 泣血叩求调剂恩，愿以丹心报师恩 +6 Iuruoh 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:06 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] （081700）化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 285化工学硕求调剂（081700） +6 柴郡猫_ 2026-03-12 6/300 2026-03-13 20:46 by hmn_wj
[硕博家园] 深圳大学硕士招生（2026秋，传感器方向，仅录取第一志愿） +4 xujiaoszu 2026-03-11 7/350 2026-03-13 17:28 by xujiaoszu
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
[考研] 一志愿山东大学，总分327，英语二79，有论文，有竞赛，已过四六级 +3 木木目目1 2026-03-09 3/150 2026-03-09 19:52 by yuningshan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭