24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2206  |  回复: 19

applexixixi

木虫 (小有名气)

[求助] 请帮我看看提取质粒的图是出了什么问题

最近提乳酸菌质粒,是改造过的pMG36e,加了一段序列,提出的质粒总是这样,怎么回事呢?
还望前辈指导一下
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cheng_xiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-12 13:41:44
applexixixi: 金币+5, 有帮助, 感谢指导 2012-04-13 10:20:23
质粒提取我也做过,看你的图电泳的时间很长啊,Marker都分的很开,看你提取的质粒弥散很严重,应该是沉淀离心后没有凉干,你可以换一种方法提,现在提取质粒的方法很多,也很简单,下次实验成功啊、、
我努力我奋斗我成功
2楼2012-04-11 20:27:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sl35537417

木虫 (正式写手)

没有质粒对照   不过貌似有基因组  这是试剂盒提的吗
3楼2012-04-11 23:40:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

applexixixi

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sl35537417 at 2012-04-11 23:40:52:
没有质粒对照   不过貌似有基因组  这是试剂盒提的吗

不是试剂盒,自己配的溶液
4楼2012-04-12 08:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

applexixixi

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cheng_xiao at 2012-04-11 20:27:47:
质粒提取我也做过,看你的图电泳的时间很长啊,Marker都分的很开,看你提取的质粒弥散很严重,应该是沉淀离心后没有凉干,你可以换一种方法提,现在提取质粒的方法很多,也很简单,下次实验成功啊、、

谢谢!
5楼2012-04-12 09:35:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sl35537417

木虫 (正式写手)

可以用RNase处理一下
6楼2012-04-12 21:56:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王雨云

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by sl35537417 at 2012-04-12 21:56:14:
可以用RNase处理一下

为什么要用RNase处理呀,RNA一般都不稳定的,自己就降解了。
7楼2012-04-13 17:11:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王雨云

金虫 (小有名气)

这个情况不知道是不是用washing buffer 洗完之后没烘干,有酒精残留的原因
8楼2012-04-13 17:14:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yijunliu

银虫 (初入文坛)

用碱裂解法提取时加P2后要注意轻轻混匀,否则容易将基因组片段打碎。加完P3后充分混匀,以将蛋白质完全沉淀如果需要很纯的质粒,建议试剂盒提取。要是要求不高,可以提取完后自己纯化一下。可以加RNA酶,RNA不会像想象的降解那么快。
9楼2012-04-13 17:17:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yijunliu

银虫 (初入文坛)

补充:还有就是看图片的话好像电泳时间有点长,可以缩短点时间。此外,加完P2后要让菌体充分裂解,但时间不要超过5min。
10楼2012-04-13 17:20:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 applexixixi 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工371求调剂 +16 陪琳看海 2026-04-04 17/850 2026-04-09 23:27 by 来看流星雨10
[考研] 0703调剂 +18 拾玖壹 2026-04-04 20/1000 2026-04-09 20:53 by zhouxiaoyu
[考研] 电子信息270求调剂 +11 terminal469 2026-04-07 11/550 2026-04-09 18:28 by hy861222
[考研] 314求调剂 +16 xhhdjdjsjks 2026-04-09 17/850 2026-04-09 18:26 by 喝醉酒N
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-08 12/600 2026-04-09 14:27 by rl1980
[考研] 招收有机化学、化工,药学,食品灯专业学生 +3 yrfhjgdj 2026-04-08 3/150 2026-04-09 10:15 by QYQX_123
[考研] 327求调剂 +10 Xxjc1107. 2026-04-06 11/550 2026-04-09 01:21 by lature00
[考研] 材料334求调剂 +21 Eecho# 2026-04-03 21/1050 2026-04-08 22:55 by 猪会飞
[考研] 求调剂 +15 熊二想上岸 2026-04-04 15/750 2026-04-08 22:52 by 猪会飞
[考研] 材料科学与工程320求调剂,080500 +12 黄瓜味薯片 2026-04-06 12/600 2026-04-08 16:26 by luoyongfeng
[考研] 求调剂 +14 张zic 2026-04-05 15/750 2026-04-08 16:14 by 一只好果子?
[考研] 284求调剂 +17 梵@@ 2026-04-06 17/850 2026-04-08 11:35 by 1shin_ichi
[考研] 一志愿西电085401求调剂 +4 sunw1306 2026-04-07 4/200 2026-04-07 16:40 by 啵啵啵0119
[考研] 化学调剂 +18 艾志恒 2026-04-03 19/950 2026-04-07 16:00 by 起飞的比熊1
[考研] 22408 318分求调剂 +4 勤奋的小笼包 2026-04-06 6/300 2026-04-07 15:05 by 纸鹤555
[考研] 372分材料与化工(085600)英二数二求调剂 +4 蓝笺片 2026-04-06 4/200 2026-04-07 12:30 by dongzh2009
[考研] 材料工程310专硕调剂 +14 捞捞我…. 2026-04-04 15/750 2026-04-06 14:18 by lqwchd
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:07 by 啵啵啵0119
[考研] 358求调剂 +7 秋gk 2026-04-04 7/350 2026-04-05 13:29 by huangmoli
[考研] 341求调剂 +3 学无止境,冲 2026-04-05 3/150 2026-04-05 09:40 by lbsjt
信息提示
请填处理意见