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请帮我看看提取质粒的图是出了什么问题
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applexixixi
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请帮我看看提取质粒的图是出了什么问题
最近提乳酸菌质粒,是改造过的pMG36e,加了一段序列,提出的质粒总是这样,怎么回事呢?
还望前辈指导一下
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质粒提取跑胶图像总是拖尾怎么回事
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质粒提取不出来
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求助:重组质粒酶切问题!请大家帮我解决一下,急!
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1楼
2012-04-11 17:57:34
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cheng_xiao
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2012-04-12 13:41:44
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有帮助, 感谢指导
2012-04-13 10:20:23
质粒提取我也做过,看你的图电泳的时间很长啊,Marker都分的很开,看你提取的质粒弥散很严重,应该是沉淀离心后没有凉干,你可以换一种方法提,现在提取质粒的方法很多,也很简单,下次实验成功啊、、
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我努力我奋斗我成功
2楼
2012-04-11 20:27:47
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没有质粒对照 不过貌似有基因组 这是试剂盒提的吗
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2012-04-11 23:40:52
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:
Originally posted by
sl35537417
at 2012-04-11 23:40:52:
没有质粒对照 不过貌似有基因组 这是试剂盒提的吗
不是试剂盒,自己配的溶液
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4楼
2012-04-12 08:54:15
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2楼
:
Originally posted by
cheng_xiao
at 2012-04-11 20:27:47:
质粒提取我也做过,看你的图电泳的时间很长啊,Marker都分的很开,看你提取的质粒弥散很严重,应该是沉淀离心后没有凉干,你可以换一种方法提,现在提取质粒的方法很多,也很简单,下次实验成功啊、、
谢谢!
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5楼
2012-04-12 09:35:25
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可以用RNase处理一下
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2012-04-12 21:56:14
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:
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sl35537417
at 2012-04-12 21:56:14:
可以用RNase处理一下
为什么要用RNase处理呀,RNA一般都不稳定的,自己就降解了。
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7楼
2012-04-13 17:11:45
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这个情况不知道是不是用washing buffer 洗完之后没烘干,有酒精残留的原因
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8楼
2012-04-13 17:14:25
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用碱裂解法提取时加P2后要注意轻轻混匀,否则容易将基因组片段打碎。加完P3后充分混匀,以将蛋白质完全沉淀如果需要很纯的质粒,建议试剂盒提取。要是要求不高,可以提取完后自己纯化一下。可以加RNA酶,RNA不会像想象的降解那么快。
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9楼
2012-04-13 17:17:53
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补充:还有就是看图片的话好像电泳时间有点长,可以缩短点时间。此外,加完P2后要让菌体充分裂解,但时间不要超过5min。
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10楼
2012-04-13 17:20:22
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