24小时热门版块排行榜    

查看: 2435  |  回复: 19

applexixixi

木虫 (小有名气)

[求助] 请帮我看看提取质粒的图是出了什么问题

最近提乳酸菌质粒,是改造过的pMG36e,加了一段序列,提出的质粒总是这样,怎么回事呢?
还望前辈指导一下
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cheng_xiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-12 13:41:44
applexixixi: 金币+5, 有帮助, 感谢指导 2012-04-13 10:20:23
质粒提取我也做过,看你的图电泳的时间很长啊,Marker都分的很开,看你提取的质粒弥散很严重,应该是沉淀离心后没有凉干,你可以换一种方法提,现在提取质粒的方法很多,也很简单,下次实验成功啊、、
我努力我奋斗我成功
2楼2012-04-11 20:27:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sl35537417

木虫 (正式写手)

没有质粒对照   不过貌似有基因组  这是试剂盒提的吗
3楼2012-04-11 23:40:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

applexixixi

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sl35537417 at 2012-04-11 23:40:52:
没有质粒对照   不过貌似有基因组  这是试剂盒提的吗

不是试剂盒,自己配的溶液
4楼2012-04-12 08:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

applexixixi

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cheng_xiao at 2012-04-11 20:27:47:
质粒提取我也做过,看你的图电泳的时间很长啊,Marker都分的很开,看你提取的质粒弥散很严重,应该是沉淀离心后没有凉干,你可以换一种方法提,现在提取质粒的方法很多,也很简单,下次实验成功啊、、

谢谢!
5楼2012-04-12 09:35:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sl35537417

木虫 (正式写手)

可以用RNase处理一下
6楼2012-04-12 21:56:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王雨云

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by sl35537417 at 2012-04-12 21:56:14:
可以用RNase处理一下

为什么要用RNase处理呀,RNA一般都不稳定的,自己就降解了。
7楼2012-04-13 17:11:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王雨云

金虫 (小有名气)

这个情况不知道是不是用washing buffer 洗完之后没烘干,有酒精残留的原因
8楼2012-04-13 17:14:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yijunliu

银虫 (初入文坛)

用碱裂解法提取时加P2后要注意轻轻混匀,否则容易将基因组片段打碎。加完P3后充分混匀,以将蛋白质完全沉淀如果需要很纯的质粒,建议试剂盒提取。要是要求不高,可以提取完后自己纯化一下。可以加RNA酶,RNA不会像想象的降解那么快。
9楼2012-04-13 17:17:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yijunliu

银虫 (初入文坛)

补充:还有就是看图片的话好像电泳时间有点长,可以缩短点时间。此外,加完P2后要让菌体充分裂解,但时间不要超过5min。
10楼2012-04-13 17:20:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 applexixixi 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 8/400 2026-08-18 11:47 by gltch
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +4 Tide man 2026-08-14 5/250 2026-08-18 11:35 by Tide man
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 5/250 2026-08-18 11:25 by 無關想念
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +43 医学老男孩 2026-08-13 97/4850 2026-08-18 11:07 by 医学老男孩
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +5 基诺咪客 2026-08-17 6/300 2026-08-18 11:06 by hunter无悔
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
信息提示
请填处理意见