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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请帮我看看提取质粒的图是出了什么问题
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applexixixi

木虫 (小有名气)

[求助] 请帮我看看提取质粒的图是出了什么问题

最近提乳酸菌质粒，是改造过的pMG36e，加了一段序列，提出的质粒总是这样，怎么回事呢？
还望前辈指导一下
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1楼 2012-04-11 17:57:34
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cheng_xiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-12 13:41:44
applexixixi: 金币+5, ★有帮助, 感谢指导 2012-04-13 10:20:23
质粒提取我也做过，看你的图电泳的时间很长啊，Marker都分的很开，看你提取的质粒弥散很严重，应该是沉淀离心后没有凉干，你可以换一种方法提，现在提取质粒的方法很多，也很简单，下次实验成功啊、、
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我努力我奋斗我成功
2楼2012-04-11 20:27:47
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sl35537417

木虫 (正式写手)
没有质粒对照   不过貌似有基因组  这是试剂盒提的吗
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3楼2012-04-11 23:40:52
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applexixixi

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sl35537417 at 2012-04-11 23:40:52:
没有质粒对照   不过貌似有基因组  这是试剂盒提的吗

不是试剂盒，自己配的溶液
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4楼2012-04-12 08:54:15
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applexixixi

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cheng_xiao at 2012-04-11 20:27:47:
质粒提取我也做过，看你的图电泳的时间很长啊，Marker都分的很开，看你提取的质粒弥散很严重，应该是沉淀离心后没有凉干，你可以换一种方法提，现在提取质粒的方法很多，也很简单，下次实验成功啊、、

谢谢！
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5楼2012-04-12 09:35:25
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sl35537417

木虫 (正式写手)
可以用RNase处理一下
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6楼2012-04-12 21:56:14
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王雨云

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sl35537417 at 2012-04-12 21:56:14:
可以用RNase处理一下

为什么要用RNase处理呀，RNA一般都不稳定的，自己就降解了。
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7楼2012-04-13 17:11:45
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王雨云

金虫 (小有名气)
这个情况不知道是不是用washing buffer 洗完之后没烘干,有酒精残留的原因
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8楼2012-04-13 17:14:25
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yijunliu

银虫 (初入文坛)
用碱裂解法提取时加P2后要注意轻轻混匀，否则容易将基因组片段打碎。加完P3后充分混匀，以将蛋白质完全沉淀如果需要很纯的质粒，建议试剂盒提取。要是要求不高，可以提取完后自己纯化一下。可以加RNA酶，RNA不会像想象的降解那么快。
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9楼2012-04-13 17:17:53
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yijunliu

银虫 (初入文坛)
补充：还有就是看图片的话好像电泳时间有点长，可以缩短点时间。此外，加完P2后要让菌体充分裂解，但时间不要超过5min。
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10楼2012-04-13 17:20:22
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