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yanggoing

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取不出来 已有3人参与

最近新购买了大肠杆菌,里面的质粒怎么也提取不出来。还麻烦高手帮我看看是什么原因所致。加了抗生素能生长,且也没有污染杂菌。提取过程如下,挑取单菌落于1ml LB培养基培养4小时,后转移50ul至25ml LB中过夜培养,菌量也看过,没有问题。用的是天根试剂盒提取,步骤都是按它上面的做,后面检测总是没有条带。请各位高手帮我看看是什么原因,谢谢
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fanwq258

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 去哪里看海 at 2014-10-08 19:09:02
楼主,你的大肠杆菌确实里面有质粒对吗???
没有用过天根的试剂盒,我们用的索莱宝,不过试剂盒的问题应该不是主要的吧??没过期吧??溶液I加入酶了吗?

前几天找出来一个5年前的质粒小提试剂盒,试了试竟然和新买的试剂盒提取质量差不多。
要么好好活,要么死,拒绝半死不活
8楼2014-10-09 14:21:08
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sunxijunim

新虫 (小有名气)



西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-11 23:03:25
你的是什么菌株呀,可能是G+ ,也许你没注意。再有可能就是你的质粒需要诱导一下大量复制吗?
低拷贝的质粒你可以培养一段时间后加入氯霉素,之后再过三到四个小时提质粒。按照说明书的步骤一步一步来。
如果还有问题的,可以继续探讨。
9楼2014-10-09 15:23:19
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qiahaoo

银虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-11 23:03:58
之前提质粒也提不出后来发现是用试剂盒提的时候裂解不充分,后来就在说明书的基础上适当增加裂解时间就好了

[ 发自小木虫客户端 ]
12楼2014-10-10 13:20:48
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生物是个坑

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yanggoing: 金币+5 2014-10-08 21:02:26
提完建议测下浓度,你说的检测是跑的电泳?按照你的秒杀若是操作没有问题那么换换试剂盒或者是传统方法SDS碱裂解法做一次试试。
2楼2014-10-08 15:49:04
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白风

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议换个试剂盒试试。
3楼2014-10-08 16:29:53
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去哪里看海

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主,你的大肠杆菌确实里面有质粒对吗???
没有用过天根的试剂盒,我们用的索莱宝,不过试剂盒的问题应该不是主要的吧??没过期吧??溶液I加入酶了吗?
4楼2014-10-08 19:09:02
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yanggoing

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 生物是个坑 at 2014-10-08 15:49:04
提完建议测下浓度,你说的检测是跑的电泳?按照你的秒杀若是操作没有问题那么换换试剂盒或者是传统方法SDS碱裂解法做一次试试。

好的 谢谢
5楼2014-10-08 21:01:48
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yanggoing

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 去哪里看海 at 2014-10-08 19:09:02
楼主,你的大肠杆菌确实里面有质粒对吗???
没有用过天根的试剂盒,我们用的索莱宝,不过试剂盒的问题应该不是主要的吧??没过期吧??溶液I加入酶了吗?

试剂盒没有过期 也加酶了 不知道是什么原因 谢谢你
6楼2014-10-08 21:05:47
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yanggoing

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 白风 at 2014-10-08 16:29:53
建议换个试剂盒试试。

好的 谢谢
7楼2014-10-08 21:06:49
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小猪没长毛

铁虫 (小有名气)

我么用的手工提法,我觉得还是菌液有问题,不然很好提的
IamOK
10楼2014-10-10 10:59:32
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